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丁香通

【求助】PCR实验目的基因的CT值和内参的CT值接近

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奶糖甜滋滋

本人第一次接触rt-PCR,SYBR染料,检测血清中的cirRNA。用trizol提的RNA,浓度大概200-600ng/ ul。内参用的GAPDH。cDNA模板稀释5倍。 现在遇到的问题是目的基因的CT值和内参的CT值差不多,并且都很高,在33-35之间,而且内参的熔解曲线有时候会出现双峰,请问为什么会出现这些情况并求有效的解决方法,感谢各位大神。
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2 个回答

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冰雪芙儿

有帮助
CT值高,提高模板浓度就行了,我最近也在做,刚开始稀释发现CT值很高,不稀释就好了
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surui321

有帮助
cDNA模板必须稀释?我测得RNA浓度一百多,8ulRNA加2ulMIX逆转录,扩增的时候直接加的逆转录以后cDNA原液。
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