在做 PCR 时比较合适的扩增产物片段长度是多少？

tao0129

2013-02-28

在 Genbank 上找到了我所需要的目的基因及其启动子序列。根据实验要求，要扩增其启动子序列（5.8Kb）来作为表达载体的驱动。想问下，在做 PCR 时比较合适的扩增产物片段长度是多少？能不能扩增像 5.8Kb 这么长的序列？设计引物时有没有什么特别的要求？（在用 primer 设计引物时，扩增产物长度不同，引物之间的 Dimer、错配等不一样）谢谢啦！

1 个回答

赵栋2012

2013-02-28

有帮助

没问题，但要注意保真性，也就是用高保真的酶或者采用分段扩增的办法。如有必要有条件，就测序验证。引物设计与你的目的片断长度似乎关系不大，其序列的特异性则是很重要的。有很多常规提高产物特异性的办法，就不一一列举了如果受到模办的局限，不妨采用巢式PCR之类的办法。