阳性克隆检测PCR问题

我用上游引物A和下游引物D扩增出一条1500bp的条带，回收、然后用内侧引物B和C检测回收产物，很特异，条带很亮，然后连接PMD19-T，M13检测有一条1500bp的条带，用引物A和D检测也很特异，但是用引物B和C检测，却什么都没有，一直想不通为什么？新手，谢谢。