阳性克隆检测PCR问题

wangchangshui

2013-10-05

我用上游引物A和下游引物D扩增出一条1500bp的条带，回收、然后用内侧引物B和C检测回收产物，很特异，条带很亮，然后连接PMD19-T，M13检测有一条1500bp的条带，用引物A和D检测也很特异，但是用引物B和C检测，却什么都没有，一直想不通为什么？新手，谢谢。

过客一名

2013-10-18

有帮助

要不用M13引物或你的引物A或D去测个序，看看究竟连接的片段是什么？

alaling

2013-10-08

有帮助

如果你是为了看条带是不是你想要的，建议最好采用测序的方法
如果你是为了看是不是有多种引物组合，很有可能是B和C对该序列不特异，即无法特异扩增你所需要的条带。

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