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蛋白脱盐纯化问题

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Enthusiasm92TX

脱盐柱纯化蛋白为什么出现两个峰,且蛋白峰与盐粒子峰分不开,还会出现沉淀

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3 个回答

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dxyc42u

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先确认分子筛本身没有问题。如果是多种蛋白质的混合物,也能确定是哪一种蛋白的聚合体,要带着蛋白质的MARK,靠电泳分析手段来初步确定。

还有一种原因应该是蛋白质和其他杂质结合造成,做电泳的时候则电泳条带一致(多在粗纯时出现)

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loveliufudan

有帮助

这种现象可能是由以下原因引起的:

1. 过度结合:如果蛋白质与柱填料或介质之间的相互作用过于强烈,蛋白质可能会过度结合,导致蛋白质无法顺利从柱中洗脱。这可能会导致蛋白质峰和盐峰重叠,难以分离。

2. 盐溶解度问题:在柱洗脱过程中,盐溶液的浓度逐渐降低,如果盐的溶解度较低,可能会在一定浓度下形成沉淀。这种沉淀可能会与蛋白质峰重叠,使得两者分离困难。

针对这些问题,可以尝试以下方法来改善纯化过程:

1. 优化洗脱条件:调整洗脱缓冲液的成分和浓度,以减少蛋白质与填料之间的相互作用,促进蛋白质从柱中洗脱。有时,使用递增的盐浓度梯度洗脱可以有效分离蛋白质和盐粒子。

2. 调整pH条件:一些蛋白质对特定的pH条件敏感,可以尝试调整纯化过程中的pH值,以提高蛋白质的溶解度和稳定性。

3. 尝试其他纯化方法:如果脱盐柱纯化存在困难,可以尝试其他纯化方法,如离子交换层析、亲和层析、凝胶过滤层析等,以选择适合的纯化策略。


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毛利小五郎的徒弟

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应该是多聚体造成的。

用非还原电泳(不含DTT)检测一下,如果有多聚体,会在单体蛋白分子量的整数倍数的地方出现条带的

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