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PCR扩增有条带,连接转化菌p有条带,送测序是载体序列,怎么解决

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dxy_hexi3anw


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4 个回答

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dxy_xextz7w2

有帮助

测出来是载体序列的话说明没有连接上,可能是引物特异性不好

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loveliufudan

有帮助

可能存在以下几种情况和解决方法:

1. 异源污染:在PCR反应或连接转化菌的过程中,可能存在来自其他样品或实验室环境的异源污染。这种情况下,建议进行严格的实验室操作和样品处理措施,以减少污染的可能性。

2. 异位扩增:条带可能来自非预期的DNA片段扩增。在PCR反应中,确保使用正确的引物和目标DNA模板,并且优化反应条件(如温度和循环数)以确保特异性扩增。

3. 载体重组或降解:在连接转化菌的过程中,可能发生了载体的重组或降解。这可能导致连接的DNA片段未能稳定地保持在载体上。建议仔细检查连接试剂和转化菌的处理步骤,并确保使用高质量的载体和连接酶。

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sswei

有帮助

引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。

循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。

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dxy_hexi3anwuser-title

是扩增的时候加减还是菌p加减

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土井挞克树

有帮助

考虑是测序中有载体污染,可以纯化后再测序

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dxy_hexi3anwuser-title

试过测切胶产物,还是不行

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