影响连接转化的因素

影响转化的因素:1.感受态细胞的状态、2.加入的质粒最好在≤200ng，3.热击1-2分钟以后，需要立刻放在冰上静置2分钟，4.摇完菌以后离心需要常温，这些没做好都会影响转化效率。

影响连接的因素:1.载体是否线性化完全，一般来说双酶切要优于单酶切，但也和酶切的温度与时间有关；2.线性载体和插入片段之间的比例需要计算好；3.连接酶以及缓冲液的量需严格按照说明书使用

主要是连接的比例和总质量，以及感受态的质量。一般建议目的DNA片段与载体的摩尔比为3：1-6：1，总质量为100-200ng，4°连接过夜。

酶切连接后转化吗，问题描述的不太清楚，酶切连接效率是很低的，影响因素有线性载体和目的片段的浓度，连接酶效率等。建议使用同源重组，连接效率很高，注意扩增目的片段时设计引物加上同源臂

1．细菌的生长状态
2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行；
3．经 cacl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加， 24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；
4．化合物及无机离子的影响
5．所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率；
6．质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的 dna ；
7．一定范围内，转化效率与外源 dna 的浓度呈正比；

⑴、受体细胞

转化的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的突变株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，它可容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。

另外还应根据载体的性质及实验的目的选择合适的宿主。

此外，受体细胞生长状态和密度也很重要。不要使用经过多次转接或储存于4℃的培养菌。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，密度过高或不足均会影响转化率。

⑵、载体DNA和重组DNA方面

载体本身性质决定了转化的高低，不同的载体DNA转化同一受体细胞，其转化效率不同。载体的空间构象也有明显影响，超螺旋结构的载体质粒往往有较高的转化率，经体外酶切连接操作后的载体DNA或重组DNA由于空间上难以恢复，其转化率常比cccDNA低两个数量级。对以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低。

⑶、操作方面

感受态细胞的制备对转化率影响较大。一般未经特殊处理的培养细胞对重组DNA分子不敏感，难以转化成功。为防止杂菌和杂DNA的污染，整个操作均应在无菌条件下进行，所有器皿最好是新的，并经高压灭菌处理，所有试剂也都要灭菌处理。

⑷、转化体系中重组DNA的浓度与纯度

转化体系中重组DNA的浓度与纯度对转化率也有一定影响。在一定浓度范围内，浓度越高，转化率越高，重组DNA纯度越高，转化率越高。

⑸、外源基因与宿主染色体的同源性

外源基因来源与宿主亲缘关系越近，越易整合到宿主染色体中，转化率越高，否则易被宿主核酸酶降解而降低转化率。

以下是一些可能影响连接转化的因素：

DNA质量和纯度：DNA质量和纯度是连接转化的重要因素。如果DNA质量和纯度不好，会导致DNA损伤、片段损失或降解，从而影响连接转化的效率。

DNA的长度：DNA长度也会影响连接转化的效率。通常来说，DNA片段的长度应该控制在合适的范围内，过短或过长的DNA片段都会降低连接转化的效率。

连接试剂的种类和用量：不同的连接试剂有不同的用量和工作条件，如果连接试剂的种类和用量选择不合适，会导致连接效率降低或者不稳定。

载体的构建和纯化：如果载体构建不完整或纯度不高，也会影响连接转化的效率。因为不完整的载体可能无法承载DNA片段，而低纯度的载体可能带有杂质，影响连接效率和稳定性。

电击转化的电压和时间：电击转化的电压和时间也是连接转化的重要因素。如果电压和时间选择不当，会导致DNA片段无法有效地进入细胞内。

菌株和培养条件：不同的菌株和培养条件对连接转化的效率也有影响。不同的菌株对不同的载体和DNA片段有不同的适应性和承载能力。因此，选择合适的菌株和培养条件，可以提高连接转化的效率和稳定性。

总之，影响连接转化的因素很多，需要综合考虑多个因素并逐一排除。最好的方法是根据实验条件进行优化，选择最适合自己实验的方法。