gateway clone实验老是失败，要么不长斑，要么长的斑提出来质粒无条带。想请教各位大佬是什么原因？

培养条件，染菌问题。提质粒也有可能出现问题

检查一下引物对不对.其次是你的模板够不够,因为农杆菌中质粒拷贝数很低.可以提出质粒后再来PCR

1.先确定你的引物没有设计错。感觉你就没有连上 2.至于你说的长糊了，感觉是抗生素失效了。

是不是培养基有问题？还有可能是抗生素有问题。