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求助各位大神,qpcr前后反应体系和程序一致,为什么两批样品中的第二批会出现明显的引物二聚体呢?

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用ABI Q5做染料法qpcr,两批样品反应体系,反应程序均一致。第一批样品引物用完后,在华大和擎科分别重新合了一样的引物,但是第二批就出现了十分明显的引物二聚体,并且检测样品的二聚体的熔解曲线峰比主峰大。做完第一批样品之后,卸载并重新安装了具有审计功能的新版软件,之后再做第二批样品时,溶解曲线就出现了明显的引物二聚体峰,Tm值在76-77℃。

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