菱兔子0
loveliufudan
除了蔗糖密度梯度离心法外,我建议您可以试试以下几种方法:
1. 不同浓度NaCl提取:利用不同浓度NaCl溶液裂解细胞,低浓度NaCl可以提取溶酶体,高浓度NaCl溶液可以获得粗提多聚核糖体。
2. 离子交换层析:利用DEAE-Sepharose等离子交换基质,依据多聚核糖体和杂质的不同电荷特性进行分离,不依赖离心力。
3. Mg2+沉淀:利用Mg2+可以特异聚集多聚核糖体的原理,在适宜浓度Mg2+条件下进行[^>~undefined沉淀提纯。
4. 亲和层析:使用多聚核糖体亚基的抗体或寡核苷酸探针设计亲和层析柱,提取目标蛋白。
5. 超滤离心:使用相对简便的超滤离心管或盒进行分子量截留,部分富集多聚核糖体。
如果仅需多聚核糖体总蛋白,可以考虑结合这几种方法进行提取,希望能对您有帮助。也建议您尝试向其他实验室借用超速离心机。
菱兔子0
大佬您好,请问正常的提取多聚核糖体,需要39000r4℃,2.5个小时,我们实验室的最高转数可达到32000r,那么如果采用31000r,3.5个小时,是否同样可以达到粗提多聚核糖体的目的?
麻黄连翘赤小豆
一般试剂盒都需要配备超速离心机,如果你有全自动密度梯度制备仪,可以用密度梯度提取方法
土井挞克树
可以利用Ficoll进行密度梯度离心,可以起到相同的效果
sswei
采用采用热板法。热板法是一种比较古老的方法。盐析法提纯多聚核糖体。或采用交联膜分离法提取。