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氨基酸的提取(可根据预实验结果适当调整样本量及比例)
①细菌或细胞:离心收集细菌或细胞至离心管内,按照细菌或细胞数量(10⁴个):提取液体积(mL)为(500-1000):1的比例(建议500万个细菌或细胞加入1 mL提取液)处理样品,冰浴超声破碎细菌或细胞(功率20%或200 W,超声3 s,间隔10 s,重复30次),沸水浴提取15 min(密封以防止水分散失),冷却至室温后,4℃ 10000 rpm离心10 min,取上清液即为待测样本。
②组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:(5-10)的比例(建议称取0.1 g组织,加入1 mL提取液)处理样品,室温研磨至匀浆,沸水浴提取15 min(密封以防止水分散失),冷却至室温后,4℃ 10000 rpm离心10 min,取上清液即为待测样本。
③血液、培养液等液体样本:吸取0.5 mL液体样本加入0.5 mL提取液,沸水浴提取15 min(密封以防止水分散失),冷却至室温后,4℃ 10000 rpm离心10 min,取上清液即为待测样本。
loveliufudan
氨基酸的提取和检测涉及到几个主要步骤:
1. 样品处理:首先,你需要将氨基酸含量较高的物质(如蛋白质)提取出来。这可能包括机械粉碎、高温加热、酶解、酸解或碱解等步骤。
2. 提取:将样品溶解在适当的溶液中(如水或有机溶剂),然后进行离心以分离出溶液中的氨基酸。
3. 净化:使用色谱或其他方法去除样品中的杂质。
4. 检测:有几种方法可以检测氨基酸,包括:
• 高效液相色谱(HPLC):经常与某种类型的检测器(如紫外/可见光检测器或荧光检测器)一起使用,以分析样品中的氨基酸。
• 气相色谱-质谱联用(GC-MS):可以用来检测衍生化后的氨基酸。
• 质谱(MS):更为精细的检测,可以提供关于氨基酸的定性和定量信息。
5. 数据分析:根据检测结果,计算样品中的氨基酸含量。
毛利小五郎的徒弟
提取:
样品用水浸泡提取,提取液减压浓缩至1∶1,加入乙醇(2倍量)除去杂质,回收乙醇,再通过强酸性阳离子交换树脂,用氨水洗脱,洗脱液蒸去氨,即得。也可用70%乙醇回流提取,提取液减压浓缩,再通过离子树脂交换。