氨基酸的提取及检测步骤

氨基酸的提取（可根据预实验结果适当调整样本量及比例）

①细菌或细胞：离心收集细菌或细胞至离心管内，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为（500-1000）：1的比例（建议500万个细菌或细胞加入1 mL提取液）处理样品，冰浴超声破碎细菌或细胞（功率20%或200 W，超声3 s，间隔10 s，重复30次），沸水浴提取15 min（密封以防止水分散失），冷却至室温后，4℃ 10000 rpm离心10 min，取上清液即为待测样本。

②组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:（5-10）的比例（建议称取0.1 g组织，加入1 mL提取液）处理样品，室温研磨至匀浆，沸水浴提取15 min（密封以防止水分散失），冷却至室温后，4℃ 10000 rpm离心10 min，取上清液即为待测样本。

③血液、培养液等液体样本：吸取0.5 mL液体样本加入0.5 mL提取液，沸水浴提取15 min（密封以防止水分散失），冷却至室温后，4℃ 10000 rpm离心10 min，取上清液即为待测样本。

氨基酸的提取和检测涉及到几个主要步骤：

1. 样品处理：首先，你需要将氨基酸含量较高的物质（如蛋白质）提取出来。这可能包括机械粉碎、高温加热、酶解、酸解或碱解等步骤。

2. 提取：将样品溶解在适当的溶液中（如水或有机溶剂），然后进行离心以分离出溶液中的氨基酸。

3. 净化：使用色谱或其他方法去除样品中的杂质。

4. 检测：有几种方法可以检测氨基酸，包括：

• 高效液相色谱（HPLC）：经常与某种类型的检测器（如紫外/可见光检测器或荧光检测器）一起使用，以分析样品中的氨基酸。

• 气相色谱-质谱联用（GC-MS）：可以用来检测衍生化后的氨基酸。

• 质谱（MS）：更为精细的检测，可以提供关于氨基酸的定性和定量信息。

5. 数据分析：根据检测结果，计算样品中的氨基酸含量。

提取：

样品用水浸泡提取，提取液减压浓缩至1∶1，加入乙醇(2倍量)除去杂质，回收乙醇，再通过强酸性阳离子交换树脂，用氨水洗脱，洗脱液蒸去氨，即得。也可用70%乙醇回流提取，提取液减压浓缩，再通过离子树脂交换。