远方_oe7m
DEAE Sepharose fast 离子交换柱(1.6×30.0cm)纯化蛋白,在上样之前需要用0.45μm的膜过滤吗?我看有的不用,有的过0.22μm的膜,有的过0.45μm的膜,怎么确定是否需要先用膜过滤呢?
loveliufudan
DEAE Sepharose Fast Flow是一种阳离子交换色谱介质,常用于蛋白质纯化。其颗粒大小通常在90-165微米范围内,因此理论上,对样品进行0.45微米或0.22微米的过滤并不会影响到色谱柱的填充物。
过滤样品的目的主要是为了去除可能阻塞柱的大颗粒物质,比如细胞碎片或未溶解的沉淀物。如果你的样品已经通过其他方法(例如离心或超速离心)去除了这些大颗粒物质,那么可能不需要再进行过滤。但是,如果你不确定样品中是否还存在可能阻塞柱的物质,那么过滤会是一个好的预防措施。
至于选择0.45微米还是0.22微米的过滤膜,主要取决于你想要去除的颗粒大小。0.22微米的过滤膜的孔径更小,能够去除更小的颗粒,但是过滤过程可能会更慢。如果你只是想要去除可能阻塞柱的大颗粒物质,那么0.45微米的过滤膜可能就足够了。
sswei
离子交换柱纯化蛋白在上样之前需要用0.45μm膜过滤。
土井挞克树
一般是否需要过0.45um的膜取决于你的样品大小,如何样品比较大,建议过一遍0.45um的膜
dxyc42u
我们一般使用0.45um的膜过滤下