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DEAE FAST FLOW使用有关问题

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2088
问:
1.DEAE FAST FLOW经过不同盐浓度洗脱后,在用初始缓冲液平衡柱子过程中,缓冲液的体积和平衡时间与什么有关?我要的蛋白等电点是4.5,用的是PH7.5的20mMTris-HCl缓冲液平衡,而且我用的是5ML的预装柱,洗脱后平衡得需要大约120ML的缓冲液,我看说明书写的只需5-6个柱体积,这是为什么呢?
2.如果自己装的DEAE FAST FLOW柱子流速不稳,时快时慢是什么原因?刚刚重装完,而且没用过几回
3.预装柱如果堵了,怎么办呢?
谢谢!

答1:
1,一般平衡的时候,是需要多冲洗几个柱体积的,我觉得为的是让你柱内的环境都是平衡液。
2,我觉得自己装的柱子,柱效肯定没有预装柱好,时快时慢,是你的样品没弄好,你可以上柱子之前过滤一下,这样影响就小了。
3,预装柱堵了,那你就用0.5M的碱试试。

答2:
堵了可以反冲试试
应该是浓度,说明书上的只是理论上的,和实际肯定有出入的。
自己装的可能是有断层

答3:
平衡一般看紫外吸收是否回到基线,至少是5以下吧,紫外也有波动的,有时候也会出现基线升高的情况,一般判断是否回到基线,就看紫外吸收线是不是平了
流速不稳可能是柱子没装好,可以重装一下试试
预装柱如果堵得太厉害,可以用异丙醇冲洗

答4:
关于第一个问题:我觉得洗脱平衡用120ml,这也太多了吧!我用过20ml的DEAE FF,平衡也只是5个柱体机,我觉得平衡时只要看电导稳定了就可以!
(责任编辑:大汉昆仑王)
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