求助小鼠组织用DHE染色测ROS具体步骤是什么呀？从来没做过，一头雾水，该买什么东西，从造模后取材开始具体步骤

以下是常用的小鼠组织DHE染色测ROS的具体步骤：

DHE的购买：首先需要购买DHE的粉末（如Invitrogen的D1168），根据实验需要配置适当浓度的DHE工作液。注意DHE需保护免于光照和水分。

取材：制备小鼠组织样品。通常建议取新鲜组织样品，制备组织切片或细胞悬液。可根据具体需要选择适当的组织取材和制备方法。

DHE染色：将组织切片或细胞悬液放入含有适当浓度DHE工作液的昏暗处的孵育皿中，如10 μM DHE在37°C下孵育30分钟。孵育后，用PBS或其它缓冲液洗涤掉未被吸附的DHE。

荧光显微镜观察：将样品放在玻璃片上，加入适当的荧光显微镜缓冲液（如PBS），在荧光显微镜下观察DHE染色情况。DHE染色荧光信号的激发波长为488nm，发射波长为610nm。

图像采集和分析：用荧光显微镜采集图像，可以使用图像分析软件（如ImageJ）来分析DHE荧光强度，根据强度值反映ROS水平。

需要注意的是，DHE染色虽然可以检测细胞内ROS产生，但该方法存在一些局限性，如可能存在背景荧光、与DHE反应产生其他代谢产物等，需要根据实验要求选择适当的ROS检测方法。

步骤

1，取出细胞爬片放养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分钟，PBS洗三遍。4，与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，PBS洗三遍。5.，一抗4度湿盒内过夜，也可37度2小时，感觉前者效果好，PBS洗三遍。6，二抗室温2小时，或者37度1半小时，PBS洗三遍。7，最好用DAPI染核，然后直接照荧光片。8，蒸馏水洗掉PBS，甘油封片，指甲油封片子的四周。