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蛋白挂柱洗脱不下来请问怎么处理

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dxy_vii4o2y3

蛋白链霉亲和素用的填料是亚氨基生物素,洗脱条件是 50mM 醋酸钠  500mM NaCl  pH4。小试的时候都是可以洗脱下来,柱子放大到100mL就没有洗脱。很多文献都是醋酸盐pH4洗脱,也试过醋酸铵没有用,pH降到3和1.5都没有洗下来。另外还试了0.1M醋酸也没有洗下来,大家有什么建议吗救救孩子吧

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2 个回答

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loveliufudan

有帮助

以下是可能的解决方案:

尝试调整醋酸钠的浓度和NaCl的浓度:您可以尝试减少NaCl的浓度,例如使用250mM NaCl或更低的浓度进行洗脱。另外,您可以尝试增加醋酸钠的浓度,例如使用100mM或更高的浓度。如果您的试剂可以承受更高的醋酸浓度,您还可以尝试使用更高浓度的醋酸(例如0.2 M或更高)。

尝试调整洗脱缓冲液的pH:您可以尝试在不同的pH值下进行洗脱。除了pH4,您还可以尝试pH3或更低的条件。请注意,pH值越低,蛋白质可能会被破坏或失活。

尝试调整洗脱缓冲液的温度:您可以尝试在不同的温度下进行洗脱。尝试更高的温度可以加速洗脱,但是请注意,过高的温度可能会导致蛋白质失活或破坏。

尝试添加其他物质:您可以尝试添加其他物质来促进洗脱。例如,您可以尝试添加10-20%的甘油或其他有机溶剂,或添加非离子表面活性剂(例如Tween-20或 Triton X-100)来促进洗脱。

尝试优化其他步骤:除了洗脱条件之外,还有其他步骤可能会影响到蛋白链霉亲和素的洗脱,例如样品制备和结合步骤。您可以尝试优化这些步骤,以改善洗脱的效果。

最后,如果您已经尝试了以上建议,但仍然无法洗脱蛋白链霉亲和素,您可能需要考虑使用其他方法来分离和纯化蛋白质。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

建议增加洗脱次数,改变ph没用的话可以增加次数进行洗脱

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