基因敲除/敲入如何验证

提基因组，在基因插入位置两侧，设计引物，扩增跑胶

基因敲除验证:

1、提取转基因小鼠的RNA，以反转录后的cDNA为模板进行基因A的PCR。

2、对照实验：提取非转基因（野生型）小鼠的RNA，以反转录后的cDNA为模板进行基因A的PCR。

3、如果对照组能通过PCR获得基因A或基因A的保守区，而实验组无结果，说明在转基因小鼠中发生了基因A的缺失。

最简单的方法就是验证b基因的表达产物。

如果A基因在干细胞阶段尚未表达，那么无法通过A基因的表达情况来验证B基因是否成功敲入。以下是几种可能的验证方法：

PCR验证：利用引物设计检测B基因的特异性，对转染后的细胞进行PCR扩增，如果有预期大小的PCR产物，则说明B基因已经被成功敲入。

Southern blotting验证：将转染后的细胞DNA提取并进行限制酶切，将切片进行Southern blotting，通过探针特异性结合，检测B基因是否被成功敲入。

流式细胞术检测：可以通过流式细胞仪检测特定标记物的表达情况，比如如果B基因是一个标记基因，那么可以用相应的抗体探测转染后细胞表达的标记物是否增加，从而验证B基因是否成功敲入。

鉴定细胞特性的变化：由于B基因被敲入后，可能会导致一些细胞特性的改变，比如细胞形态的变化、增殖能力的改变等，通过对转染前后细胞的对比，来验证B基因是否成功敲入。

利用CRISPR/Cas9技术对B基因进行敲除，验证敲除后是否导致一些特性的变化，从而推断B基因是否成功敲入。