罗氏应用科学部是最早致力于向用户提供非放射性标记技术的公司之一。罗氏专利的地高辛产品上市近二十年，尽管有许多出色的竞争者涉足这一领域，尽管有定量PCR技术的应用，该系统仍然是非放射性高效标记-检测技术的首选，被广泛地应用到各种膜杂交及原位杂交技术中。 技术原理： 地高辛标记技术源于一种从洋地黄类植物（毛地黄和毛花毛地黄）中提取的类固醇（Steroid）物质—— Digoxigenin （DIG），其在医学上可用于治疗各种急性和慢性心功能不全以及室上性心动过速、心房颤动和扑动等疾病。由于洋地黄植物的花和叶片是DiG在自然界中的唯一来源，因此抗DIG的抗体不会与其他生物物质结合，从而可以满足特异性标记的需要。这一点，正是DIG胜于生物素(Biotin)的地方——同样是小分子标记物，生物素广泛存在于各种组织中，对于灵敏度很高的标记检测实验来说，样品自身含有的内源生物素，就会对结果产生干扰。地高辛就能够很好地避免这个问题。 技术特点： 与放射

原子吸收分光光度法是基于元素所产生的原子蒸气中待测元素的基态原子，对所发射的特征谱线的吸收作用进行定量分析的一种技术，常用的定量方法有：　　1.标准曲线法：将一系列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程分别进行测定，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。在相同条件下处理待测物质并测定其吸光度，即可从标准曲线上找出对应的浓度。由于影响因素较多，每次实验都要重新制作标准曲线。　　2.标准加入法：把待测样本分成体积相同的若干份，分别加入不同量的标准品，然后测定各溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，标准品加入量为横坐标，绘制标准曲线，用直线外推法使工作曲线延长交横轴，找出组分的对应浓度。本法的优点是能够更好地消除样品基质效应的影响。　　3.内标法：在系列标准品和未知样品中加入一定量样本中不存在的元素（内标元素），分别进行测定。以标准品与内标元素的比值为纵坐标，标准品浓度为横坐标绘制标准曲线，医学教|育网搜集整理再根据未知样品与内标元素的比值依曲线计算出未知样品的浓度。本法要求内标元素应与待测元素有相近的物理和化学性质。只适用于双通道型原子吸收分光光度计。

EMS常用浓度0.05-0.5mol/L，作用时间5-60min。 人工化学诱变技术: 化学诱变技术是指利用一些化学物质提高生物的自然突变率，这些化学物质就叫做“化学诱变剂”。其特点有：可操作性强，简单易行；特异性较强，能诱变定位到DNA上的某些碱基；后代较易稳定遗传，一般到F3代就可稳定；应用于遗传标记，是细胞融合技术的基础。 诱变剂主要包括5类，他们的特点、机理和应用如下： 1、烷化剂：能使一些碱基烷基化，比如使鸟苷酸甲基化，影响mRNA的转录，从而使蛋白质的表达紊乱，使得蛋白质重组，而改变了性状。临床上应用此类物质作为抗癌药物，具有强烈杀伤癌细胞的作用，所以在应用在于植物上时，也要注意他的强烈杀伤性。 主要有：甲基磺酸乙酯（EMS），是最常用的诱变剂，我们曾用作真菌的遗传标记，诱变率很高。常用浓度0.05-0.5mol/L，作用时间5-60min。该物质具有强烈致癌性和挥发性，可用5%硫代硫酸钠作为终止剂和解毒剂。SIGMA公司价格：80元/

化学试剂（chemical regent）产品成千上万种，是进行化学研究、成分分析的相对标准物质，是科技进步的重要条件，广泛用于物质的合成、分离、定性和定量分析，可以说是化学工作者的眼睛，在工厂、学校、医院和研究所的日常工作中，均离不开化学试剂。通常是把它们分为无机化学试剂 、 有机化学试剂 和 生化试剂 三 大类。但是各类化学试剂同时因为纯度、杂质含量、用途等的不同，而存在多个级别。 国产化学试剂一般是按杂质含量的多少而分成四个级别： 一、LR试剂 ： Laboratory reagent ，实验级试剂，为四级试剂，简写为LR。 二、CP试剂 ： Chemical pure ，化学纯试剂，为三级试剂，简写为CP，一般瓶上用深蓝色标签。 三、AR试剂 ： Analytial reagent ，分析纯试剂，为二级试剂，简写为AR，一般瓶

化学试剂的良好的包装和储存，合理的运输管理，可以防止试剂的污染、变质和损耗，并可大大减少燃烧、爆炸、腐蚀和中毒事故的发生。 盛装固态、液态化学剂的容量一般有玻璃、塑料和金属的三类。玻璃容器可以盛装各种化学试剂，包括可燃性的高纯度的试剂。而塑料和金属容器虽不适宜于盛装各种化学试剂，但比玻璃容器不易破裂。化学试剂所采用的包装容器是根据试剂的性质和纯度来确定的。 常见的玻璃容器有玻璃瓶和安瓿两种。前者适宜于盛装各种纯度级别的化学试剂，包括分析试剂、层析纯试剂、痕量分析试剂、 MOS 级试剂和有机合成试剂等。后者则往往用于盛装需要完全密封不使散逸的化学试剂，如重氢试剂。但是，玻璃容器不宜盛装能与玻璃起化学反应或玻璃能起催化作用的一些化学试剂，前者如氢氟酸，后者如双氧水。 容量大的玻璃容器易在运输或使用过程中破裂，通常都用钢套或强化的聚苯己烯套加固。

贮藏化学试剂既要保管好试剂不使变质或损耗，又要注意危险性试剂的毒害作用，防止火警、中毒、损害以及放射性污染等事故的发生。试剂贮藏的一般措施如下： • 密闭 盛装试剂的容器与能使之变质的环境尽可能隔断，即采用密封的容器，如紧密盖闭的铁桶、密闭的金属容器和容量不大于 1 升 的紧密盖闭的玻璃瓶。密闭贮藏适用于具有挥发、升华、潮解、风化、析晶、水解、氧化、还原、霉变等性质的试剂，是贮藏试剂最常用的方法。 试剂瓶视察闭程度和试剂腐蚀性不同用磨口玻璃塞（适用于硝酸、盐酸、硫酸和液溴等）或具有塑料衬垫的螺旋帽盖。为使封口严密，可采用胶套的配制方法：将胶套混合液（硝化纤维：胶：蓖麻油：乙醚：乙醇 =13 ： 0.5 ： 36 ： 50 ）倒入瓶塞模中，数秒后即形成薄膜，趁膜未干时取下泡浸于 75% 乙醇中备用。封口时，将合适的胶套套在已经好的瓶塞上，待其收缩后，瓶口即可密封。对于易分解产生气体的试剂，绝对不能密封，否则易发生

问题： 凝胶电泳操作应注意哪些事项？ 回复： 1. 琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。 2. 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。 3. 电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应常更新电泳缓冲液。 4. 样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量，加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定。当加样孔大时，样品上样量应相应加大，否则会造成条带浅甚至辩认不清；反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。 5. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。采用不同浓度的凝胶有

1.营养肉汤培养基 　　牛肉膏 0.3克 　　蛋白胨 1.0克 　　NaCl 0.5克 　　水 100毫升 　　pH 7.0～7.2 　　在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。 　　2.营养琼脂培养基 　　在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。 　　3.肉汁蛋白胨液体培养基 　　牛肉 500克 　　蛋白胨 10克 　　NaCl 5克 　　pH 7.1～7.2 　　取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15

1。甲基绿和吡罗红： 实验原理: 甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.利用甲基绿,吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布. 试剂及配制方法 （1）试剂 质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉，可以分别购买甲基绿和吡罗红G，然后按A液的第二种方法配制（见下文）。 （2）染色剂的配制 ①染色剂A液的两种配制方法 第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入到100 mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。 第二种方法：取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中，取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。取6

至今，还没有一种固定化方法可以普遍地适用于每一种酶，特定的酶要根据具体的应用目的选择特定的固定化方法。已建立的固定化方法，大致可分为三类：载体结合法（包括物理吸附。离子结合法、鳌合法。共价结合法），交联法和包埋法（包括聚合物包埋法、疏水相互作用、微胶囊、脂质体包埋）。 载体结合法： （1）物理吸附法: 是制备固定化酶最早采用的方法，它足以同体表面物理吸附为依据，使酶一水不溶性载体相接触而达到酶吸附的目的。 （2）鳌合法 :这是一种比较吸引人的技术，它主要是利用螫合作用将酶直接赘合到表面含过渡金属化合物的载体上，具有较高的操作稳定性。 （3）共价结合法: 共价结合法是通过酶分子上的功能团，与载体表面上的反应基团发生化学反应形成共价键的一种固定化方法，是研究得最多的固定化方法之一。 共价交联法: 共价交联法是通过双功能或多功能试剂，在酶分子间或酶分一产和载体间形成共价键的连接方法。

酶作为生物催化剂，在许多化学反应中具有不可低估的作用。酶催化剂作为生物进化的高级形式，通过酶，尤其固定化酶的催化作用，可以简化生产工艺、降低生产成本、改善操作环境，其经济效益是非常可观的。随着人们对环境保护和生活质量要求的提高，酶在医药、食品、纺织、环保等领域的应用日益广泛。酶工程技术已成为生物工程技术的重要组成部分，无论是基因工程、蛋白质工程。细胞工程和发酵工程都需要酶分子的参与。酶催化的高效性、特异性、产品的高效回收和反应体系简单等优点使酶工程技术成为现代生物技术的主要支柱之一。本文主要介绍 酶制剂在医学中和环保方面的应用。 环保方面的应用 水净化 水与人类的生活息息相关，离开水的滋

根据酶分子大小和形状的分离方法 (1)离心分离 许多酶往往富集于某一特定的细胞器内，因此匀浆处理后应先通过离心得到某一特定的亚细胞成分，如细胞核、线粒体、溶酶体等，使酶先富集10-20倍，然后再对某一特定的酶进行纯化。一般离心力越大，离心时间就越短。 (2)差速离心和等密度梯度离心分离 对于某一悬浮液，可先选用较低的转速进行离心，但分辨率较低，仅适用于粗提或浓缩。如果制备的离心介质的密度梯度范围包括了待分离样品中所有颗粒的密度，那么经较长时间的离心后，各种颗粒沉降在与其密度相同的位置，这种离心称为等密度梯度离心。常用的离心介质有氯化铝、澳化钾、碘化钠等，这种方法在核酸研究中应用更为广泛。 (3)凝胶过滤 分离酶蛋白时，分于大小大于凝胶孔径的蛋白被凝胶排阻，因而在凝胶颗粒间隙中移动，速度较快；小分子蛋白质则可自由出人凝胶颗粒的小孔内，路径加长，移动缓慢。这样通过一定长度的凝胶层析柱后，大小不同的分子蛋白就被分开了。此外，凝胶过滤法还可用

在酶的发酵生产过程中，为了提高酶的产量，除了选育优良的产酶细胞外，还可以采用一些与酶发酵工艺有关的措施，例如添加诱导物、控制阻遏物浓度等。例如添加诱导物、控制阻遏物浓度等。 (1)添加诱导物 对于诱导酶的发酵生产，在发酵培养基中添加诱导物能使酶的产量显著增加。一般可分为三类：①酶的作用底物，例如青霉素是青霉素酚化酶的诱导物。②酶的反应产物，例如纤维素二糖可诱导纤维素酶的产生。③酶的底物类似物，例如异丙基-ß-D-硫代半乳糖昔（IPTG）对ß-半乳糖昔酶的诱导效果比乳糖高几百倍。其中使用最广泛的诱导物是不参与代谢的底物类似物。 (2)降低阻遏物浓度 微生物酶的生产受到代谢末端产物的阻遏和分解代谢物阻遏的调节。为避免分解代谢物的阻遏作用，可采用难于利用的碳源，或采用分次添加碳源的方法使培养基中的碳源保持在不致于引起分解代谢物阻遏的浓度。例如在丹半乳糖昔酶的生产中，只有在培养基中不含葡萄糖时，才能大量诱导产酶。对于受分解代谢物阻遏的酶，可通过控制末端产物的浓度使阻遏解

是一种蛋白质，稳定性差，而且在催化结束后难以回收。为适应工业化生产的需要人们模仿人体酶的作用方式，通过同定化技术对酶加以改造固定。经固定化后的生物催化剂既具有酶的催化性质，又具有一般化学催化剂能回收反复使用的优点，并在生产工艺上可以实现连续化和自动化。随着固定化技术的发展，定化的对象已不一定是酶，亦可以是微生物或动植物细胞和各种细胞器，这些固形物可统称为生物催化剂。至今，还没有一种固定化方法可以普遍地适用于每一种酶，特定的酶要根据具体的应用目的选择特定的固定化方法。已建立的固定化方法大致可分为三类：载体结合法（包括物理吸附。离子结合法、鳌合法。共价结合法），交联法和包埋法（包括聚合物包埋法、疏水相互作用、微胶囊、脂质体包埋）。固定化酶及固定化技术研究的发展可分为两个阶段，“第一阶段”主要是载体的开发、固定化方法的研究及其应用技术的发展目前则已进人了“第二阶段”主要包括含辅酶系统或ATP、ADP、AMP系统的多酶反应系的建立，以及疏水体系或含水很低的体系的固定化酶催化反应的研究。近年来，人们又提出了联合固定化技术，它是酶和细胞固定化技术发展的综合产物。与普通的固定化酶或固定化细胞相比联合

目的要求 （1）学习双向纸层析的原理。 （2）掌握纸层析法分离混合氨基酸的操作方法。 实验原理 纸层析是以滤纸作支持物，用一定的溶剂系统展开，使混合样品达到分离分析的层析方法。其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中，点样在滤纸的一端；再选用适当的溶剂系统，从点样的一端通过毛细现象向另一端展开，展开完毕，取出滤纸晾干或烘干，再以适当的显色剂或紫外灯、荧光灯下观察其图谱。样品经展开后某一物质在纸层析谱上的位置常用比移值Rf 来表示。 Rf= 纸层析可看作是溶质（样品）在固定相与流动相之间的连续抽提，由于溶质在两相之间的分配系数不同而达到分离。一定的物质在两相间有固定的分配系数，因而在恒定条件（液剂、PH、温度）下，各物质有固定的Rf 值，据此可达到分析鉴定的目的。 由于滤纸纤维可吸收20～25%的水分；且其中6～7%以氢键形式

SOB培养基 配制每升培养基，在950ml去离子水中加入： 胰化蛋白胨 20g 酵母提取物 5g NaCl 0.5 g 摇动容器使溶质完全溶解。加10ml 250mmol／L KCl溶液(将1.86g KCl用100ml去离子水溶解即配成250mmol/l KCl溶液)。用5mol/L NaOH调pH值至7.0。用去离子水定容至1L。在15 psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min。该溶液在使用前，加入5ml灭菌的2 mol/l MgCl2[2mol／L MgCl2溶液的配制方法如下：用90ml去离子水溶解19g MgCl2，用去离子水调整体积为100ml，在15psi(1.05kg／cm2)高压下蒸汽灭菌20min]。 SOC培养基 SOC培养基除含有20mmol／L葡萄糖外，其他成分与SOB培养基相同。SOB培养基经高压灭菌后冷至60℃或60℃以下，加20ml除菌的1mol／L葡萄糖溶液(1mol/l葡

菌袋生产是指出菇培养基配制（简称拌料）、装袋、灭菌、接种四个环节。 出菇培养基的配制（简称拌料） 香菇袋料栽培原料以木质类、纤维类、半纤维素为主，配糖类碳水化合物及一定量的含氧化合物机和无机机盐、维生素等。在多种原料中都不同程度的含碳水化合物，其中，木屑、棉籽壳、玉米含量较高，含氧化合物以米糠、麸皮为主,尿素可少量配给；无机盐有生石膏、磷酸二氢钾、过磷酸钙等。此外，麸皮及米糠中富含维生素，按比例加入的麸皮或米糠所含维生素基本可以满足菌丝生长的需要。 拌料，就是按一定的配方将料混合，以供装袋之用。拌料时，首先准备主原料木屑，将木屑先行过筛（筛孔以1厘米长方形为宜）。切屑机粉碎木屑可直接用于拌料。再向备好木屑中加入麸皮、生石膏粉并拌匀。将糖及其它营养、药品放入较大容器中，加水并搅动，溶化后备用。将溶解后的糖及其它营养液均匀兑水加入木屑与麸皮、石膏的混合料中，翻倒3遍，测其含水量，以手握料成团，落地后散开为宜。（含水量不能

　培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。 　　 一、组成培养基的五类成分 　　目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。 　　1.无机营养物 　　无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。 　　2.碳源 　　培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。因此

45种培养基配方 45种培养基配方 （细菌与植物培养基） 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg

1.配制溶液 　　向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 　　配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 　　2.调节pH值 　　用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 　　3.过滤 　　用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好