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WB 实验大赛来了,瓜分 1000 现金!

「丁香实验」小程序上线后,已经汇集上万条实验 protocol、常见操作问答、科研方法文章等。 为了能给科研人带来更多的交流与互助,现开展一期「WB 实验大赛」。 晒出你的实验方法和结果图( beta-actin 或者其他内参均可)就有机会瓜分 1000 元现金奖! 你将会获得丰富奖金上至 500元/人、丰富的科研周边、建立个人专题打造个人 IP 、增加实验室曝光、论文引用机会! 我们希望你有着丰富的 WB 实验经验,实验优化小建议,并愿意分享自己的经验。 你需要完成1、入群参与活动,上传个人 WB 结果图与步骤2、分享个人实验页面,邀请同学、好友为你点赞! 活动参与方式扫描下方海报中的二维码,立即参赛!

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Cell 子刊|吃石榴能抗衰老吗?

肌肉质量和力量随着年龄的增长而逐渐下降是不可抵抗的自然规律,但饮食和锻炼等环境因素则可影响其下降的速度和趋势。不过截至目前,还没有有效的干预措施来对抗与年龄相关的肌肉衰退。虽然说运动和营养膳食是预防和管理与年龄相关的肌肉健康下降和代谢性疾病的主要干预措施,但一定强度的锻炼需要长期的坚持,而这却很难维持。 尿石素 A(Urolithin A, UA)是源于膳食的菌群衍生代谢产物,可激活线粒体自噬,在动物模型中具有改善衰老动物的肌肉健康的作用。UA 是鞣花丹宁、多酚化合物的代谢产物,这种前体很容易获得,在自然界中几乎是无处不在的。常见的富含鞣花酸和鞣花单宁的食物包括石榴、树莓、蓝莓、核桃等。 UA 也已被证明在衰老和疾病的临床前模型中具有诱导损伤线粒体自噬功能。另外,从临床转化的角度来看,久坐的老年人口服 UA 4 周后,能显著增强骨骼肌中线粒体基因的表达,从而达到改善细胞健康的目标。 2022 年 5 月 17 日,来自瑞士的一个科研团队在 Cell Reports Medicine 发表了题为 Urolithin A improves muscle strength, exercise

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磁性细胞分选技术

磁性细胞分选(MACS)是一种20世纪70年代发展起来的相对高效简便的细胞分选方法,所需设备和操作较为简单,对操作人员的技术要求也不高,只是让细胞处于一个低磁场中,基本可以忽略对细胞的影响,分离得到的细胞具有较高的复苏率及细胞活性,对于下游应用影响较小,在保持细胞活性方面优于流式分选,是细胞分选的首选方法,具有潜在的应用前景。1 磁性细胞分选原理磁性细胞分选是基于免疫学中抗原抗体之间特异性结合的原理进行的。以磁性 ...

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Cell 子刊|非必需氨基酸可抑制食欲、促进运动?

摄入的食物如何控制我们的大脑和行为一直是人们非常感兴趣的问题。过去的研究表明,蛋白质可以抑制食欲,因此很多减肥人群通过适当增加饮食中蛋白质的摄入比例来帮助减肥,这也是近年来高蛋白饮食方式越来越受欢迎的原因之一。 蛋白质在肠道中被分解成氨基酸,根据人体是否可以通过自身合成或从其他氨基酸转化而来,可将氨基酸分为必需氨基酸与非必需氨基酸两类。尽管人们已经知道,必需氨基酸和非必需氨基酸都可以抑制食欲,但对于非必需氨基酸,其在生物体内的作用方式尚未得到证实。 近日,苏黎世联邦理工学院的研究人员首次在生物体中证明,非必需氨基酸(non-essential amino acids, NAAs)以抑制食欲和促进运动的方式影响大脑,研究成果以 Ingested non-essential amino acids recruit brain orexin cells to suppress eating in mice 为题发表在 Current Biology 上,他们的研究揭示了控制这种行为背后的神经机制。 研究成果(图源:Current Biology) 为了实现对摄入时间和摄入内容物的精确控制,研

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PCR 基因扩增原理与步骤大解析

一、实验概要PCR 扩增目标 DNA 片段。 二、实验原理多聚酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)基本原理类似于 DNA 的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR 由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。1. 模板 DNA 的变性:模板 DNA 经加热至 93℃ 左右一定时间后,使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;2. 模板 DNA 与引物的退火(复性):模板 DNA 经加热变性成单链后,温度降至55℃ 左右,引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合;3. 引物的延伸:DNA 模板-引物结合物在 Taq DNA 聚合酶的作用下,以 dNTP 为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性、退火、延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需 2~4分钟, 2~3 小时就能将待扩增的目的基因扩增放大几百万倍。 典型的 PCR 反应

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人NK细胞高效扩增方法总结

NK细胞是人体免疫的第一道防线,具有非限制性杀伤的特点,如何发挥NK细胞的免疫作用从而治疗肿瘤等疾病是一个重要的课题。因为NK细胞仅占外周血的5-10%,细胞数量的稀少往往是制约研究的一个重要原因。本产品用于从单个核细胞(MNC)在体外高效扩增成NK细胞,具有扩增效率高,目的细胞百分比高的特点,起始单个核细胞经过14天培养,总细胞数可以扩增约50倍左右,NK细胞数可以扩增500倍以上,且纯度可达70%-85%(由于 ...

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快速分离单个核细胞方法总结

【实验操作步骤】1 使用移液管(枪)吸取15ml淋巴细胞分离液注到50ml分离管下室(15ml分离管吸取4ml);注意:请用移液管直接将淋巴细胞分离液通过隔板小孔注到分离管下室,勿将分离液置于分离管上室,否则分离液难以流至下室,影响后续分离操作。2在50ml分离管中加入2-30ml稀释血液样品(15ml分离管倒入0.5-8ml);注意:1)请勿将稀释血液样品注入到隔板下室;2)请将稀释血液从隔板上方缓缓加入,所加入的位置勿 ...

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动员外周血单个核细胞分离方法和注意事项

正常人外周血中的干/祖细胞的含量占有核细胞数的1%左右,经有效动员后,骨髓中的造血干细胞会释放到外周血中,使外周血中的干/祖细胞比例明显增高。动员外周血是指用有效的动员剂对供者进行动员后采集的外周血。重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)是外周血动员最常用的动员剂,它可选择性的作用于粒系造血祖细胞,促进其增殖、分化,并可增加外周血中性粒细胞的数目和功能。动员外周血单个核细胞是采集经动员后的健康供者的外周血,采 ...

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骨髓单个核细胞分离方法及注意事项

骨髓单个核细胞(Bone Marrow Mononuclear Cells,BMMNCs)是一群混合细胞,其中绝大多数是早幼粒细胞、早幼红细胞、成熟B细胞、T细胞和单核细胞等,还含有少量的干细胞,包括间充质干细胞、造血干细胞和内皮祖细胞等,它们密度相近,因此可通过密度梯度离心法从骨髓液中分离出来。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同,在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此,可利用各种血细胞和单个核细胞 ...

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脐带血单个核细胞分离方法和注意事项

脐带血是指胎儿出生时脐带内及胎盘近胎儿一侧血管内的血液。脐带血单个核细胞(Cord Blood Mononuclear Cell,CBMC) 分离自正常人胎盘脐带组织,是脐带血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞等,是机体防御系统的一个重要组成部分。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同,在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此,可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离 ...

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脾脏单个核细胞分离方法及注意事项

脾脏(spleen)位于上腹部左后侧,体积较大,长条形,是体内最大的淋巴器官,也是血流通路中的过滤器官。脾脏内定居着大量的淋巴细胞和其它免疫细胞,是机体发生特异性免疫应答的场所。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与其它细胞不同,在沉降过程中不同比重的细胞会处于不同的分布位置。因此,可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各种血细胞与单个核细胞分离开来。2 方法1)无菌条件下取出脾脏,在培养皿中加入适量的分离液,将脾 ...

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外周血单个核细胞(PBMC)分离方法及注意事项

外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞(Lymphocyte)、单核细胞(Monocyte)、树突状细胞(DC)和其他少量细胞。1 原理单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其它细胞不同,红细胞和多核白细胞的比重超过1.080,单个核细胞的比重为1.070左右,血小板为1.030左右。因此,可利用各种血细胞和单个核细胞比重之间的差异将各 ...

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CYP450酶代谢表型研究(化学抑制法)原理及实验方法

01 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容,它不仅决定了创新药物制剂研发的成败,而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而,药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用,研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广,加上代谢转化的器官和酶系的多样性,使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低,代谢产物 ...

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Ⅱ相代谢稳定性研究原理及实验方法

1 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容,它不仅决定了创新药物制剂研发的成败,而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而,药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用,研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广,加上代谢转化的器官和酶系的多样性,使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低,代谢产物的 ...

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Ⅰ相代谢稳定性研究原理及实验方法

01 概述1.1 药物代谢研究简介药物代谢研究是创新药物研发的重要内容,它不仅决定了创新药物制剂研发的成败,而且与创新药物研发的速度和质量有密切关系。因而,药物代谢研究在新药研发工程中具有不可或缺的重要作用,研究药物代谢对于了解药物在体内的变化过程至关重要。药物代谢研究的方法主要分为体内和体外两种。体内代谢法因药物在生物体内的分布较广,加上代谢转化的器官和酶系的多样性,使药物及其代谢产物在体内的浓度比较低,代谢产物 ...

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这三点不学会,你的文献可能白读了

对于科研人员来说,在日常学习和工作中,除了需要阅读权威的专业书籍和著作,很多时候还需要阅读大量的学术文献。尤其是对于那些刚刚接触全新研究领域的科研人员来说,阅读学术文献则是打开这一领域知识宝库、取得研究成果的一块「敲门砖」。然而,当接触从来没有涉足过的研究领域内文献时,很多人往往显得不知所措,也不知道如何去高效地阅读文献。比如,不知道哪些是权威学术期刊、文章里的图表数据看不懂、专业英语单词不会认,以及对最新进展和 ...

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细胞学堂丨养不好RAW 264.7,是因为忽略了这几点,RAW264.7分化有哪些问题要注意

养过RAW 264.7细胞系的小伙伴,都容易为一个问题感到苦恼:它太容易分化了!到底怎样才能养好它呢?RAW264.7细胞培养注意事项有哪些,今天我们就给大家分享一些心得。RAW264.7细胞培养之基础篇RAW264.7细胞培养的第一步,是要对它的基础培养条件了如指掌,比如生长特性、细胞形态、所需的培养基,甚至培养环境、传代比例等等,做到知己知彼,才能百战百胜。 ▲产品详情细胞系:RAW 264.7培养基:CM-0190▲RAW26 ...

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教您正确选择逆转录酶,适用 6 种不同应用

逆转录反应,作为分子生物学研究的基本技术之一,已经广泛应用到多个研究领域,可以说是科研人员进行 RNA 功能研究的看家本事。众所周知,逆转录的应用领域有以下 6 种:逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)定量RT-PCR(RT-qPCR)cDNA 克隆和文库构建cDNA 末端快速扩增(RACE)基因表达芯片RNA 测序(RNA-Seq)今天,小编就整理了一些贴士,帮助大家在面对 6 种不同的应用时,如何正确选择逆转录酶。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)在 RT-PCR 中,逆转录酶将 RNA 转化为 cDNA,然后通过 PCR 反应扩增 cDNA,为下游实验提供研究模板,因而逆转录酶是实验成功的关键步骤之一(如下图)。选定的逆转录酶应对所有样本均具有最高效率,即便是难转录 RNA 样本,如降解、抑制剂残留或具有高度二级结构的 RNA 样本。图. 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。RT =逆转录,RTase =逆转录酶常用的 RT-PCR 方法分为一步法和两步法,每种方法都各有优缺点,简要概述如下:表. 对比一步法和两步法 RT-PCR 定量 RT-PCR(RT-qPCR)定量 R

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反转录过程中需要考虑哪些因素?

为了研究 RNA 的功能,通常需要通过反转录过程将 RNA 转化为更稳定的互补 DNA(cDNA)。之后 cDNA 可通过分子克隆、PCR 和测序等技术做进一步的研究。因此,反转录过程是许多 RNA 实验研究流程的关键步骤。为了获得更为准确的研究结果,本期总结了反转录过程中需要考虑的一些因素,以期能够抛砖引玉,给你的实验研究带来些许帮助。 本期内容RNA 模板制备基因组 DNA 的去除反转录酶选择引物选择主要反应组分反应温度和反应时间第一链和第二链 cDNA 合成注:本期内容较多,阅读完此文需要大概 8 分钟。 一、RNA 模板制备RNA 是反转录的模板。总 RNA 通常用于 RT-(q)PCR 等下游应用的 cDNA 合成,而特定类型的 RNA(如信使 RNA(mRNA)、miRNA 等小 RNA)可通过富集而用于某些实验应用,如 cDNA 文库构建和 miRNA 图谱分析。 保持 RNA 的完整性至关重要,在提取、处理、储存和实验过程中均需要采取特殊的保护措施。防止RNA降解的最佳方法包括佩戴手套、使用具有气溶胶屏障的移液器移液、使用无核酸酶的实验室器具和试剂以及对实验区域进行去污

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做了这么多的 WB,你知道化学发光和荧光可以一起检测吗?

一台 WB 成像系统可以同时拍摄化学发光和荧光信号,这个功能有什么用途呢?一篇 2014 年发表在 Cell Stem Cell 的文章为了研究硫巯基化如何影响信号通路,就需要在进行 Western Blot 时同时捕捉2种信号。蛋白质硫巯基化(S-sulfhydration, SHY)是一种依赖H2S的蛋白质翻译后修饰。H2S 作用于蛋白质的半胱氨酸残基,把巯基(-SH)转变为硫巯基(-SSH),改变蛋白空间结构,调控了蛋白的活性和功能。这篇文章主要研究硫化氢(H2S)调节 Ca2+ 通道硫巯基化,来维持间充质干细胞的功能和骨稳态。骨髓间充质干细胞产生H2S协助调节自我更新和成骨分化。H2S 缺乏会导致 Ca2+TRP 通道上多个半光氨酸残基的硫巯基化程度降低,产生钙内流异常。异常的钙内流会下调 PKC/Erk- 介导的 Wnt/β-catenin 信号,从而影响到成骨分化。结果提示通过无毒供体恢复 H2S 水平,可以治疗 H2S 缺乏导致的骨质疏松症等疾病。有趣的事情来了。在验证 H2S 通过 Ca2+ 通道的巯基化调节钙内流时,研究人员将 BMMSCs 分成了 2 组,一组使用

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