猴 B病毒 (HS) 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猴血清，血浆及相关液体样本中 B病毒(HS) 的 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 猴 B病毒 (HS) 水平。用纯化的 猴 B病毒 (HS) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 B病毒 (HS) ， 再与HRP 标记的 B 病毒 (HS) 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 B病毒 (HS) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中猴 B病毒 (HS) 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置

鸡痘病毒（FPV ） 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定样本中 鸡痘病毒（FPV） 的 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 鸡痘病毒（FPV ） 水平。用纯化的 鸡痘病毒（FPV ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 鸡痘病毒（FPV ） ，再与HRP 标记的 鸡痘病毒（FPV） 抗体结合，形成抗体- 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 鸡痘病毒（FPV） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 鸡痘病毒（FPV ） 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置

犬 内毒素 （endotoxin） 酶联免疫分析（ELISA） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定犬血清，血浆及相关液体样本中 内毒素 （ET） 的 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 犬 内毒素 （ET） 水平。 用纯化的 犬 内毒素 （ET） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 内毒素 （ET） 再与HRP标记的ET抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB显色。TMB在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 内毒素 （ET） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（OD值）， 通过标准曲线 计算样品 中犬 内毒素 （ET） 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存

猪口蹄疫病毒（FMDV ） 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中 猪口蹄疫病毒（FMDV） 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 猪口蹄疫病毒（FMDV ） 水平。用纯化的 猪口蹄疫病毒（FMDV ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 口蹄疫病毒（FMDV ） ，再与HRP 标记的 FMDV 抗体结合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 猪口蹄疫病毒（FMDV ） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 猪口蹄疫病毒（FMDV ） 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48孔配置

猪瘟病毒（CSFV）抗体 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中 猪瘟病毒（CSFV）抗体 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗 原 夹心法测定 标本 中 猪瘟病毒（CSFV ）抗体 水平。用纯化的 猪瘟病毒（CSFV ） 抗 原 包被微孔板，制成固相抗 原 ，往包被 抗原 的微孔中依次加入 猪瘟病毒（CSFV ）抗体 ，再与HRP 标记的 猪瘟病毒（CSFV ） 抗原结合，形成抗原- 抗体 - 酶标抗原复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 猪瘟病毒（CSFV ）抗体 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 猪瘟病毒（CSFV ）抗体 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48孔配置

猪 细小病毒抗体 (RPV) 酶联免疫 分析 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中 细小病毒抗体 (RPV) 的含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双 抗原 夹心法测定 标本 中 猪 细小病毒抗体 (RPV) 水平。用纯化的 猪 细小病毒 (RPV)抗原 包被微孔板，制成固相 抗原 ，往包被单抗的微孔中依次加入 细小病毒抗体 (RPV) ，再与HRP 标记的 细小病毒抗体 (RPV) 抗原结合，形成抗原- 抗体 - 酶标抗原复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 细小病毒抗体 (RPV) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中猪 细小病毒抗体 (RPV) 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成 48孔配置

猪 乙型脑炎病毒抗体（ JEV-Ab ） 酶联免疫 分析（ ELISA ） 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猪血清，血浆及相关液体样本中 乙型脑炎病毒抗体（ JEV-Ab ） 含量。 实验原理 ： 本试剂盒应用双抗 原 夹心法测定 标本 中 猪 乙型脑炎病毒抗体（ JEV-Ab ） 水平。用纯化的 猪 乙型脑炎病毒 抗 原 包被微孔板，制成固相抗 原 ，往包被 抗原 的微孔中依次加入 乙型脑炎病毒抗体（ JEV-Ab ） ，再与HRP 标记的 乙型脑炎病毒 抗原结合，形成抗原- 抗体 - 酶标抗原复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 乙型脑炎病毒抗体（ JEV-Ab ） 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度（ OD 值）， 通过标准曲线 计算样品 中 猪 乙型脑炎病毒抗体（ JEV-Ab ） 浓度。 试剂盒组成 ： 试剂盒组成

http://www.lcxw.cn　2011-12-09 08:47:39　 本报讯 “这里是公司新投产的SOD项目，采用基因重组技术构建高效表达工程菌生产SOD，达产后可年产SOD500公斤，产值达10亿元，多项应用技术填补了国内外空白。”12月5日，山东博奥克生物科技有限公司副总经理耿英贤向记者介绍说。目前，该公司已与十几家科研院所签订SOD酶、纳米抗体、羟基色氨酸等高端生物科技项目。 “燎原光电产业园作为九州国际高科园的重要项目，目前正在规划建设中，力争通过五年，打造成为国家级的光电产业园区。园区分三期建设：一期重点发展产业链及相关项目；二三期主要用于承接LED 产业转移企业和LED配套产业集群，建成后可成为全球最大的LED分装生产基地。”山东燎原发光科技有限公司副总经理田丽萍介绍说。 博奥克生物科技有限公司、燎原光电产业园等一批高新项目在开发区九州国际高科园内蓬勃兴起。开发区为加快扶持战略性新兴产业集群发展，规划建设了九州国际高科园，以绿色节能产业、健康产业、现代服务业为主题，重点培育节能环保产业集群、生物技术产业集群和研发与生产服务产业

人工设计转录因子来调控目标基因的表达已经不是梦想，基于锌指蛋白结构域的设计已经展开。锌指蛋白结构域能够结合于特定的三个碱基配对的DNA序列上。RNA干扰和反义核酸技术能够抑制基因的表达，而人工设计转录因子能够升高目标基因的表达，从而为疾病的新治疗方法开辟了新的思路。Nature Biotechnology上新发表的两篇文章为基于锌指蛋白结构域的转录因子设计提出了新的观点。 Kim et al.在整个基因组范围内寻找编码锌指蛋白结构域的序列，并分别分析这些结构域的结合特性，得到了56种不同的结构域对三连碱基对DNA序列有不同的结合特异性。研究者接着把这些结构域三三组合观察是否能够产生9个碱基对的特异性。从这些锌指蛋白结构域中，转录因子被设计为能够结合人类血管内皮生长因子的启动子，设计得到的转录因子也确实能够特异性结合并激活人类血管内皮生长因子的表达。 Barbas and colleagues也在基因组范围内寻找可以激活和抑制基因表达的转录因子。研究者用一个随机产生的锌指蛋白构成的文库转化到人类细胞中去，分析细胞表面蛋白的异位表达情况

经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 　　这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋ 梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示的RNA条带更为锐利。 1） 在灭菌的微理离心管内，混匀下列液体： 6mol/L乙二醛 5.4 μl DMSO 16.0 μl 0.1mol/L磷酸(pH7.0) 3.0 μl RNA（多达10 μl） 5.4 μl市售乙二醛通常为40％溶液（6mol/L）。 由于接触空气的后乙二醛易于氧化，所以使用前需通过混合床树脂（Bio-Rad AG 501-X8 对乙三醛溶液进行去离子处理，直至溶液pH值大于5.0为止，然后可分装在小份， 用盖紧的小管贮存于－20 ℃。每小份乙二醛溶液只用1次，剩余液体应予丢弃。0.1mol/L磷酸钠（pH7. 0）的配法如下：将3.9

1） 用酸性酚 - 硫氰酸胍 - 氯仿提取纯化组织和细胞中的 RNA 1. 选取从组织细胞或细胞中提取 RNA 的适宜方法 组织 a. 分离组织并立即置于液氮中。 b. 将约 100 mg 冰冻组织含液氮的研钵中，用研棒研磨。研磨过程中可加入液氮使组织保持冰冻状态。 c. 将组织碎末移入含 3 ml 溶液 D 的管中。 D 溶液（变性液） 4 mol/L 硫氰酸胍 25 mmol/L 柠檬酸钠・ 2H2 O 0.5% （ m/V ）月桂基磺酸钠 0.1 mol/L β - 巯基乙醇 将 250 g 硫氰酸胍、 0.75 mol/L （ pH 7.0 ）柠檬酸钠 17.6 ml 和 26.4 mol 10% (m/V) 月桂基磺酸钠于 293 ml 水中。加入搅拌子于磁力搅拌器上 65 ℃混匀，直至完全溶解。室温贮存溶液 D ，每次临用前加入 14.4 mol/L 的β - 巯基乙醇，每 50 ml 溶液 D 加 0.36

1） Poligo(dT)- 纤维素层析法提取 poly(A)+ RNA 装柱与填柱 1. 取 oligo(dT)- 纤维素 0.5 ～ 1.0 g ，用 0.1 mol/L NaOH 重悬。 2. 用 oligo(dT)- 纤维素（ 0.5 ～ 1.0 ml 柱体积）灌注 DEPC 处理过的一次性柱子（或塞以无菌玻璃毛的巴式滴管， 300 ℃烘烤灭菌 4 h ）。用 3 倍柱体积 DEPC 处理过的水洗涤柱子。 3. 用无菌的 1 ×装柱缓冲液（用无菌的 DEPC 处理过的水稀释 2 ×的贮存液）洗涤柱子，直到流出液的 pH 值＜ 8.0 。用 pH 试纸测试。 4. 用双蒸灭菌的水溶解 RNA ， 65 ℃， 5 min 处理溶液。将溶液快速冷却到室温，并加入 1 倍体积的 2 ×装柱缓冲液。 柱上 poly(A)+ 的恢复 5. 将 RNA 溶液加到柱上，并立即用无菌的管子收集流出液。当所有的 RNA 溶液

聚丙酰胺凝胶电泳 中性聚丙烯酰胺凝胶电泳 安装电泳装置和配制凝胶溶液 1. 必要时可用 KOH/ 甲醇清洗玻璃板和间隔片。 2. 用温热的去污剂溶液洗涤玻璃板和间隔片，再充分漂洗，先用自来水，再用去离子水。应拿取玻璃的边缘部分或带手套操作，以免手上的油脂残留在玻璃板的工作面上。用乙醇冲洗玻璃板，并将其置于一边晾干。 3. （可做可不做）其中一块玻璃板的一面用硅化液处理（如 Sigmacote 或 Acrylease ）：在化学通风厨内，将玻璃板放于一叠纸巾上，倒少量硅化液于其表面上，用 Kimwipes 纸巾涂抹均匀，然后用去离子水冲洗、纸巾擦干。 4. 安装玻璃与间隔片： a. 将较大的（不带凹口）玻璃板平放在实验台上，在玻璃板的两侧将间隔片平行置于其边缘放妥。 b. 用凡士林轻涂以助于间隔片在后面的操作中保持原位。 c. 将内板（带凹口的玻璃板）在间隔片上放妥。 d.

脉冲场凝胶电泳 1 ）高分子量 DNA 琼脂糖凝胶块制备和加工 1． 收集 10ml 全血，加入 30ml 细胞裂解液。置冰浴中至少 20min 直至红细胞完全溶解。 2． 2000r/min 离心 10min ，移去红色上清液，再次用细胞裂解液洗涤细胞，然后用 PBS 重悬细胞。 3． 稀释单细胞悬液并取一小份用 Neubauer 腔计数细胞。 4． 用 PBS 重悬细胞，以达到 40 μ l PBS 中含 1 百万个细胞比例（ 1 百万个二倍体哺乳动物大约含有基因组 DNA 10 μ g ） 5． 用 PBS 配制 2 ％浓度低熔点琼脂糖溶液并保持在 50 ℃。 6． 将等体积（各 1ml ）细胞悬液与琼脂糖溶液于室温下混匀，立即倒入凝胶块模具中。 7． 静置 20min 让琼脂糖固化，用无菌塑料杯（通常用作划菌）将凝胶块自模具中取出并置入蛋白酶缓冲液中，加入 2mg/ml 的蛋白酶 K 。 8． 将带有凝胶块的蛋白酶 K 缓冲液于 50 ℃保持 2 ～ 3 天。每个盛有

RNAi实验原理与方法 近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。 一、RNAi的分子机制 通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effector steps)。在起始阶段，加入的小分子RNA被切割为21-23核苷酸长的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs, siRNAs)。证据表明；一个称为Dicer的酶，是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员，它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因，病毒感染等各种方式引入的双链RNA，切割将RNA降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs)，每个片段的3’端都有2个碱基突出。 在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物

第一向（等电点聚焦， IEF ） 1 ）凝胶条的准备 1． 以帽凝胶端（ 2 个校准环： 4mm 和 10mm ）朝下，将 4 根玻璃管插入两个凝胶灌注装置的每个托架中，这样玻璃管恰好站在两个分隔室之一的“充填船”上。从玻璃管顶端到玻璃管底端拉入 PP 线（小心，线不易移动），否则以后将不能用它们将胶溶液拉上来。 2． 溶解分离胶溶液和过硫酸铵溶液。必须监控凝胶溶液的温度，因为高温下（大于 25 ℃）聚合作用太快。 3． 分离胶溶液除气 4 分钟，在桌子边缘轻弹玻璃管壁，避免产生气泡。 4． 融化帽凝胶溶液，除气，步骤同 3 。 5． 用 Gilson 移液管加 35 μ l APS 到 1365 μ l 分离胶溶液中，溶液应小心摇晃，避免氧气进入胶内。 6． 将分离胶溶液加到两个凝胶灌注装置的每一个充填船里（每 4 个管 700 μ l ）。所有的玻璃管末端都必须浸没于凝胶溶液中。 7． 小心将 PP 线抽出，将凝胶溶液拉上至 23mm 的标记。 8． 换充填船

随机引物法：利用寡核苷酸延伸法进行纯化 DNA 片段的放射性标记 1. 在一个 0.5ml 的微量离心管中加入溶于 30 μ l 水的模板 DNA(25ng) 及 1 μ l 随机脱氧核苷酸引物（约 125ng ）。盖紧微量离心管，置于沸水浴中 2min 。 2. 将微量离心管移至冰上放置 1min ， 4 ℃下离心 10s 使引物与模板的混合物沉降至管底，将微量离心管重新置于冰上。 3. 在引物与模板的混合物中加入： 5 mmol/L dNTP 溶液 1 μ l 5 ×随机引物缓冲液 10 μ l 10 mCi/ml [ α -32 P] dNTP 5 μ l （比活性 3000 Ci/mmol ） 水 加至 50 μ l 5 ×随机引物缓冲液： 250 mmol/L Tris (pH8.0) 25 mmol/L Mg

相互作用在生理上的证实和探索 l 通过免疫共沉淀确定结合蛋白 1． 用磷酸盐缓冲液洗 30 块 10 cm 培养板上的适宜细胞。刮去每块板上的细胞到 1 ml 冰冷的 EBC 裂解缓冲液中。 2． 将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离心机上 4 ℃以最大速度离心 15 min 。 3． 收集上清（约 30 ml ）并加入 30 μ g 的适当抗体， 4 ℃摇动免疫沉淀物 1 h 。 4． 加入 0.9 ml 的蛋白质 A-Sepharose 悬液， 4 ℃摇动免疫沉淀物 30 min 。 5． 用含 900 mmol/L NaCl 的 NETN 洗蛋白 A-Sepharose 混合物，再重复洗 5 次。最后，用 NETN 洗一次。 6． 吸出混合物的液体部分。加入 800 μ l 的 1 × SDS 胶加样缓冲液到球珠中，煮沸 4 min 。 7． 将样品加入到大孔的不连续 SDS-PAGE 梯度胶中，在 10 mA 的恒定电流下电泳过夜。 8．

快速分析过去已确定的相互作用 l 利用 BIAcore 通过表面胞质基因共振光谱学分析相互作用的蛋白质 RAMc 通过伯氨基与 CM-5 传感芯片表面的结合 1． 将 CM-5 传感芯片模块嵌入 BIAcore 仪器。 2． 全部采用过滤并除气的 HEPES 缓冲盐溶液。 3． 将分别含有 NHS 、 EDC 、乙醇胺和 RAM Fc 以及 20 mmol/L HCl 各 100 μ l 的小管置于 BIAcore 自动进样器架的适当位置。 4． 将一个空管置于 BIAcore 自动进样器架上。 5． 开动仪器，以 5 μ l/min 的流速流过一个流动池。 6． 将 75 μ l 的 NHS 加入到一个空管中。 7． 在同一个管中再加入 75 μ l 的 EDC 。 8． 将含有 NHS 和 EDC 的小管中的成分混匀。 9． 注射 35 μ l NHS/EDC 混合物使表面活化。 10． 注射 35 μ lRAM Fc

叶绿体RNA的体外加工与紫外交联分析RNA RNA的合成 l DNA 模板的线性化 1． 根据供应商的指导用合适的限制酶酶解含有 DNA 模板（如亚克隆在转录载体如 pBluescript® （ Stratagene ）上的菠菜叶绿体 psbA 基因）的质粒（ Schuster and Gruissem1991 ）。 2． 用 DNA 琼脂凝胶（ Sambrook et al. 1989 ）分析线性化质粒以检查酶解是否完全。 3． 用乙醇沉淀 DNA （ Sambrook et al. 1989 ），并重悬 DNA 沉淀于水中，调整线性 DNA 终浓度为 200 μ g/ml 。 l DNA 模板的转录 1． 向微量离心管加入下列反应液 DNA 模板 2 μ l （ 0.4 μ g ） 反应缓冲