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【交流】重组蛋白A在免疫试剂应用中的新进展

重组蛋白A在免疫试剂应用中的新进展广州精达公司-美国免疫学博士 胡勇摘要 抗体是免疫诊断试剂领域最重要的原料,蛋白A是纯化抗体最有效的工具,广泛用于免疫诊断试剂的许多领域。重组蛋白A具有产量大,成本低,纯度高,特异性好的优点。重组蛋白A的国产化将极大促进免疫诊断试剂的产品开发和市场效益。 关键词 抗体纯化 免疫诊断试剂 重组蛋白A 国产化蛋白A(Protein A)为金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白,具有与人类和哺乳动物血液中免疫球蛋白IgG分子的Fc段特异性结合的能力,广泛应用于各种免疫诊断试剂的制备,包括抗体的检测和纯化、免疫细胞化学、病原体的快速诊断;蛋白A也可用于免疫吸附治疗领域。采用发酵、基因诱导、镍柱纯化生产的重组蛋白A使得其成本下降、纯度提高、特异性增强,已经成为免疫诊断试剂抗体制备中最重要的工具!目前,国外有2-3家蛋白A的产品在中国销售,但价格昂贵;国内已有数家公司开展了蛋白A 的克隆或表达,其中,广州精达公司采用美国克隆和生产工艺,顺利的完成了该种产品的国产化。I、蛋白A的应用范围1、用于抗体的检测和纯化 由于蛋白A与IgG具有特异性结合

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从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记

发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Apr 28 14:37:18 2005) WWW-POST 本文献给YL 引子  2000年5月6日,我一个人在合肥三孝口书店闲诳,希望买点参考书带出国去。我注意到有一本翻译过来的书, 书名叫做《蛋白质纯化与鉴定实验指南》。这本书很奇怪,里面列出了很多具体实验的步骤和解释。我很快意识到,这本书实际上是冷泉港实验室开设的一门《蛋白质纯化与鉴定》实验课的教材。这本书深深的吸引了我, 因为里面记录的实验十分经典,涵盖了蛋白质纯化中可能用到的大部分手段,并且对实验细节有十分详尽的解释。 我对这本书爱不释手,于是就买了下来, 而且当时就动了上这门课的念头。这是一个很模糊的想法,没有想到的是,五年以后这个想法竟然实现了。 这一系列文章是我对这次上课经历的全面总结,一部分是八卦,一部分是流水账般的记叙,还有一些是从这课程学到的tricks, 最后也掺杂着自己过去做蛋白质纯化的心得。想到哪说到哪,文字挺松散的,见笑了。 我来解释一下标题。课程结束之后,每一个学员都有一份证书,印着Per Pura

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【资源】SDS-PAGE经验集锦:有详细的操作细节!

【我们实验室的SDS-PAGE改良集锦】蛋白SDS-PAGE电泳及定量在《蛋白质技术手册》基础上,根据实验条件的方便修改。请仔细看各种细节改良,各种操作效果经本实验室5年验证。【一】 储存液配制(均4℃冰箱保存,用完放回)(1)2 M Tris-HCl (实测pH 8.9±0.1,25℃) 500 mL:121 g Tris base加350 mL双蒸水溶解,以玻璃棒搅拌约1 min,缓慢加入浓盐酸(11.8 M)20 mL,继续搅拌均匀,并使Tris全部溶解,溶液澄清,加入适量双蒸水至500 mL,倒入无色玻璃试剂瓶中,4℃冰箱保存。(2)100 g/L SDS 溶液: 10 g SDS (要求高纯度,其质量明显影响电泳效果)加100 mL双蒸水,于洁净的250 mL烧杯中进行微波加热溶解,注意不要爆沸,间歇用玻璃棒搅拌以加速溶解,完全溶解后的溶液应清澈透明无色。倒入无色玻璃试剂瓶中,4℃冰箱保存。冰箱取出后可微波加热促进储存液的溶化。(3)75%(v/v)甘油:于500 mL量筒中倒入分析纯甘油300 mL,加双蒸水100 mL,以一次性塑料手套封口,颠倒量筒使甘油完全溶解,然后倒

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蛋白质纯化-人人都会用到的实用技术

蛋白质纯化-人人都会用到的实用技术研究的最后还是要看基因表达产物,无论是用于检测还是用于棉衣保护,都需要将表达出的蛋白质分离和纯化,然而蛋白质性质各异,故纯化方法不同,现共享一些基本的纯化方法,以飨读者:蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质,综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异,利用一种同时多种性质差异,在兼顾收率和纯度的情况下,选择蛋白质 ...

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脂肪氧化酶活性测定

各位同学,本人前些日子做了脂肪氧化酶活性测定的工作,遇到了一些问题,想在这里向大家请教,希望大家能不吝赐教,来帮助我解脱心中的迷惑。本人是做植物材料的,从叶片中提取粗蛋白,0.5g叶片使用液氮研磨,加入到4ml冰预冷提取缓冲液(0.05mol/L PH6.4 磷酸钠缓冲液,1mmol/L EDTA,1%PVP,1mmol/LDTT)中,12,000g,4℃离心10min,取上清进行脂肪氧化酶酶活性分析。通过检测234nm光吸收(Beck ...

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【资源】转帖:蛋白质纯化技术指南

蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质,综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异,利用一种同时多种性质差异,在兼顾收率和纯度的情况下,选择蛋白质提纯的方法。蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在,每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,到目前为止,还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何 ...

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关于光合作用中的蛋白质!

我搞的是光合作用中的蛋白质。现在大家似乎都乐意去研究最前沿、最热门的东西,如干细胞、信号转导、神经生物学、细胞分化及衰老等,而基础研究受到了大家的冷落。光合作用是绿色植物、藻类和某些光合细菌在光照下将光能转化为化学能,并利用二氧化碳和水等无机物合成有机物同时释放氧气的过程,是地球上最重要的化学反应。光合作用在叶绿体上进行,包括光反应和暗反应两个过程,其中光反应是由光系统I(photosystem I,PSI)和光系统 ...

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核磁共振技术在结构生物学研究中的应用

核磁共振技术在结构生物学研究中的应用颜贤忠(国家生物医学分析中心)1. 前言人类基因组计划提供了大量新的信息,并由此改变了生物学研究的方式。这些信息特别在结构生物学领域产生巨大影响,导致了一个新的研究领域的产生,这就是结构基因组学,或者叫做基于结构的功能基因组学。基因组学的主要问题之一在于它不能确定新的基因产物的生物学功能,而这正是功能基因组学要解决的问题。利用新的基因与已知功能基因之间的序列同源性比较,人们在发 ...

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【原创】转载Western Blot 内参选择攻略(美季生物技术有限公司)http://www.majorbio.cn/NewsInfo.asp?id=289

Western Blot 内参选择要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然,顺利的时候Western Blot做起来很简单,可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟,作为一种有活性的生物大分子,抗 ...

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【资源】上海药物所化学蛋白质组学研究中心研究成果被CELL杂志网站列为2011年研究亮点

2011年上海药物所与芝加哥大学Ben May癌症研究所赵英明教授合作,组建化学蛋白质组学研究中心,开展高效、灵敏、可靠的蛋白修饰调控酶靶标发现及生物标记物鉴定新技术的研究工作,探索更为快速和有效的新药研究途径。中心成立后,赵英明教授、谭敏佳博士等研究人员即开展相关研究工作,并取得重要进展,他们与上海药物所叶阳研究员及相关国际团队通力合作,发表在国际顶尖杂志《细胞》上关于组蛋白翻译后修饰系统研究的论文,近日被《细胞》 ...

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残留菌体蛋白含量测定规程

1材料和试剂:1.1.1包被液:碳酸盐缓冲液,PH9.61.1. 2洗涤液:PBS-Tween20,PH7.41.1.3稀释液:0.5%BSA-PBS-Tween20,PH7.41.1.4底物缓冲液:柠檬酸-磷酸盐缓冲液,PH5.01.1.5底物液:邻苯二胺8mg溶于底物缓冲液20ml,30%H2O230ul1.1.6终止液:1mol/LH2SO41.1.7兔抗大肠杆菌抗体1.1.8 HRP酶联兔抗大肠杆菌抗体1.1.9菌体蛋白标准:中国药品生物 ...

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【原创】比色杯

比色杯比色杯也叫样品池,吸收器或比色皿,用来盛溶液,各个杯子壁厚度等规格应尽可能完全相等,否则将产生测定误差。玻璃比色杯只适用于可见光区,在紫外区测定时要用石英比色杯。不能用手指拿比色杯的光学面,用后要及时洗涤,可用温水或稀盐酸,乙醇以至铬酸洗液(浓酸中浸泡不要超过15分钟),表面只能用柔软的绒布或拭镜头纸擦净。比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积,有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸 ...

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【资源】中肽生化-多肽合成技术系列 Stapled Peptides

中肽生化技术系列 Stapled Peptides 杭州中肽有限公司α-螺旋是蛋白二级结构最常见的一种,将其用于药物研发受到了大量关注。多肽的不稳定构象导致易被酶水解以及生物利用率低,这些都可以通过α-螺旋结构构象的稳定化来解决。Hydrocarbonstapled peptides是在特定位点引入化学交联的一种全烃化装订,将迷你蛋白锁定在他们的生物活性的α-螺旋构象中。多肽装订的理念是用于克服两大类治疗试剂的靶向细胞内蛋白相互作用的局限性:小分子和蛋白生物制剂。作为一类新兴的下一代药物,Stapled Peptide应该具备易于合成和容易进入细胞的能力,以及能够多靶标识别的生物活性。有两种构象化策略用于引入和稳定α-螺旋结构,即α双取代(甲基化螺旋骨架)和巨环桥形成(约束构象)。在多肽内装订从而使两个合适的空隔合并:α-甲基化,α-alkenylglycine残基,有确定的立体化学构象和烯烃链长度,然后在树脂上进行钌介导的烯烃复分解反应,从树脂上切割并去保护后便可产生Stapled Peptide。下图显示了在多肽中产生稳定α-螺旋的三种不同的全烃装订类型。α-甲基化和α-alke

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【资源】常用DNA去除方法比较

FDA、SFDA对重组蛋白、vero细胞疫苗等生物制品的DNA残留均有严格要求,近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题,引起了社会和业界的广泛关注。为什么一个看似简单的问题,却给众多专业人员带来如此大的困扰?一方面是由于DNA超强的化学稳定性,另一方面是由于DNA其带有大量的电荷易与其他生物大分子结合从而产生聚集(吸附)、包裹作用而难以完全除去。DNA的去除方法主要有层析、膜过滤、离心、沉淀、酶解等方法。这里对工业上应该最广泛和有效的离子交换层析、鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法进行比较。1. 离子交换层析DNA带有大量的负电荷,可以被阴离子交换剂吸附而除去(或用阳离子交换剂负吸附)。离子交换层析在生物制品的生产中广泛使用,负载量大、成本低廉,尤其工艺中本身具有这些步骤的情况,不需单独增加去除DNA的步骤,通过控制吸附、洗脱条件,就能取得良好的去除DNA的效果。其缺点是在DNA残留要求较高的情况下难以达到。原因在于,当目标产物与DNA带有同种电荷时,分离较为困难;而当目标产物与DNA带相反电荷时,两者会发生聚集和包裹现象,影响去除效果。2. 鱼精蛋白沉淀鱼

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【原创】 氨基酸态氮的测定

关键词:标准物质 食品成分检测 化学试剂 分析试剂 一、双指示剂甲醛滴定法 1.原理 氨基酸具有酸性的一COOH基和碱性的一NH2基。它们相互作用而使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液 时一NH。基与甲醛结合,从而使其碱性消失。这样就可以用强碱标准溶液来滴定一COOH基,并用间接的方法测定氨基酸总量。 2。试剂 ①40%中性甲醛溶液:以百里酚酞作指示剂用氢氧化钠40%甲醛中和至淡蓝色。 ②0.1%百里酚酞乙醇溶液。 ③0.1%中性红50%乙醇溶液。 ④O.1mol·L-1氢氧化钠标准溶液,标定后使用。 3.操作步骤 移取含氨基酸约20~30 mg的样品溶液2份,分别置于250 mL锥形瓶中,各加50 mL蒸馏水,其中1份加人3滴中性红指示剂,用O.1mol·L-1氢氧化钠标准溶液滴定至由红变为琥珀色为终点;另1份加入3滴百里酚酞指示剂及中性甲醛20 mL,摇匀,静置1 min,用O.1mol·L-1,氢氧化钠标准溶液滴定至淡蓝色为终点。分别记录两次所消耗的碱液体积。 4.

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【原创】多肽合成定制服务

一:公司介绍 武汉明皓生物科技股份有限公司(http://www.moonbiochem.com)坐落于武汉东湖高新技术区光谷生物城, 是由一批在生命科学领域具有相当丰富经验的归国博士及经验丰富的专家共同创办的专业的生物公司。武汉明皓生物始终以“一切以客户为本”为理念,致力于为从事生命科学研究的科研人员提供高质量的化合物,多肽,蛋白及抗体产品以及高效优质的生物技术外包服务。 武汉明皓生物科技股份有限公司重在以高品质高质量为基础,以高满意度的客户服务为立命之本。我们坚信我们良好的发展前景和不断完善的经营模式,会为更多的客户提供更完美的,更贴心的服务。二:我们的专长(1)普通线性肽,链长至120个氨基酸,毫克至克级,纯度可达99%(2)简单修饰肽:免费提供N端乙酰化,末端酰胺化(3)C端:酰胺化(NH2),生物素标记 (用赖氨酸侧链连接),PEG2(用赖氨酸侧链连接), C-FITC(用赖氨酸侧链连接),C-AMC N端:乙酰化(AC),生物素标记(Biotin),脂肪酸修饰(Pal, Myr),罗丹明标记, N-FITC,N-5

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【转帖】步骤、注意事项、经验等

[转载]个人整理 Western Blot(步骤简略,但注意事项、经验总结、基本原理很全面)螺旋网1、 丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺,应以温热(以利于溶解双丙稀酰胺)的去离子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N,N’-亚甲双丙烯酰胺储存液丙稀酰胺29g,N,N-亚甲叉双丙稀酰胺1g,加H2O至100ml。)储于棕色瓶,4℃避光保存。严格核实PH不得超过7.0,因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的。使用期不得超过两个月,隔几个月须重新配制。如有沉淀,可以过滤。2、 十二烷基硫酸钠SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS,1mlH2O去离子水配制,室温保存。3、 分离胶缓冲液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合,加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。4、 浓缩胶缓冲液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中,用约48ml 1mol/L HCL调至pH6.8加水稀释到100ml终体积。过滤后4°C保存。这两种缓冲液必须使用Tris碱制备,再用

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【共享】分子生物基础知识(图文)

下面是一些分子生物学基础知识,有助于某些实验的理解。E. coli is a Gram-negative, rod-shaped bacterium about 2.5 micrometers long that contains flagella and a genome of 4,639,221 base pairs encoding at least 4000 genes。 The K12 strain was first isolated in 1921 from the stool of a malaria patient and it has been maintained ...

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RNAi技术讨论专栏

1.在设计RNAi实验时,可以先在以下网站进行目标序列的筛选:http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.htmlhttp://katahdin.cshl.org:9331/RNAi/http://www.ic.sunysb.edu/Stu/shilin/rnai.html2.RNAi目标序列的选取原则:(1)siRNAs with lower G/C content (35-55%) are more active ...

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怎么阅读质粒图谱?

最近由于实验需要, 需要查阅载体图谱, 到园子里搜罗一番, 发现虽然有人问载体图谱阅读的问题, 也有前辈回答, 但都不详细, 借自己也在琢磨这个问题的机会, 将我学到的东西整理一下, 于大家分享, 也算我对 DXY 的一点小小贡献!载体主要有病毒和非病毒两大类, 其中质粒 DNA 是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素1、复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。2、抗生素抗性基因 可以便于加 ...

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