cindy18180 各位好，小女子第一次做细胞转染，有许多问题想请教，请大家多多指导:)首先，我要获得我的目的基因,在genebank上面查到mRNA全长3526bp，cds：713-2767我想问是不是我要的目的基因的有效片段是2054bp，适合用什么方法获得呢？用RT-PCR会不会太长了，扩不出来，或者效果不好？急用，请教各位前辈zjubell 你应该是想做过表达吧，那你的质粒上应该有启动子的吧，比如CMV。那你只需要 ...
linaque 信号通路RhoA/ROCK中，ROCK特异性抑制剂我们一般采用Y-27632、fasudil等，若想研究ROCK活性上调，是否有ROCK特异性的激动剂呢?我查了很多文献都没查到。求助，谢谢！linaque 没人知道吗？急，谢谢！阿兰梦 'Lipid messengers such as arachidonic acid (AA) or sphingosine phosphorylcholine (SPC) are able to efficiently stimul ...
dongxiao1214 我是研二的学生，打算构建过表达载体和RNAi载体，想用慢病毒载体，但是慢病毒载体有好多，怎么选择一种最合适的呢？而且现在也没有慢病毒载体，公司都不卖的，我想问问，有慢病毒载体系统的可否卖给我一套，不胜感激。老板让我3月份就开始做实验，但是现在还没有材料，很着急，希望各位行行好，让我怎么感谢都可以。沈玉琳 1，如果什么材料都没有的话老板还让做，说明这个老板很水，鄙视2，建议找公司做，这样很快，而且现在 ...
llj1985 我构建了一个转录因子表达载体，用了pcDNA3.1(+)基础载体，转染进入293T后免疫荧光检测，发现只在胞质中有表达，不知道为什么，请达人指点！谢谢了devil19840 pcDNA3.1(+)上没有任何标签，你的荧光是什么荧光呢？GFP？如何连接上去的？如果是融合表达很多时候会有GFP的单体泄露表达，而GFP单体大部分就位于胞浆中。所以不如用WB检测一下你的蛋白是否有表达，表达状态如何，最好能用GFP抗体检 ...
zllxash 请问各位研究内质网应激的战友;1、在给予细胞的应激刺激后如何检测细胞的内质网应激程度，有没有一个定量的检测标准呢？2、如何判断内质网应激引起的未折叠蛋白的三条通路激活的判断方法？通过看文献发现有的查的是受体蛋白，有的查的是下游分子，有什么区别？十分感谢！juliyxu 你好，请你帮帮我，关于膀胱癌细胞UMUC3！谢谢您了！请您看到后能否尽快回复我！谢谢了！真的急需帮忙！我给您发站内信息了，急死了！我是华东理 ...
曾经在水一方 请教各位大侠，如何查找融合基因的mRNA序列？比如说PML/RARA，可以利用Map viewer 分别查出PML和RARA的mRNA序列，然后在融合位点拼接吗？有什么可用的方法，请大家帮我推荐一下。谢谢了bingbing6612 这是问题吗？学过分子生物学的都知道曾经在水一方 让您见笑了。还请您不吝赐教。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号 ...
birkin 我在尝试转染某种细胞，载体是购买的商业载体（pCMV6)，之前转染HEK293作为预实验，已经用WB证明有效，但是换到现在这种细胞之后就很奇怪，一开始想用短期转，结果WB做不出来，觉得可能是转染率太低，于是又改做稳定转染，用了G418筛选。花了近2个月，细胞稳定下来了，取样做RT-PCR，有相当强的mRNA表达（-RT和对照组转染也做了的，基本没有带，所以不会是污染），谁知做WB还是一点东西都没有……我都快疯了 ...
64249087 菜鸟求助：已知靶基因，怎样筛选相关的miRNA?lide658 可以通过一些生物信息学数据库先找到与之可能作用的miRNA，然后根据种子序列结合的程度以及其他参数进行选择，比较常用的是targetScan.当然还有很多，最好是选择在多个预测软件都能预测到的miRNA，在或者就是针对靶基因进行处理后，做miRNA芯片，这样针对性更强，但费用较高。64249087 谢谢了！elvayal 理论上,是所有的已知基因 ...
pangpangfish 小弟欲检测T细胞的端粒长度，以对比分选细胞寿命优势，鉴于经费很有限，请各位老师指导选择适宜的检测方法，主要是费用低，又比较容易实现的，先谢谢了。pangpangfish 补充一下，是小鼠的T细胞yxunm 楼主的问题解决了吗？能否告诉我有哪些备选？楼主最后选择了哪一种？P.S.实验室新手，菜鸟一只！有劳楼主！jackhui03 你好，我也想测端粒长度以及端粒酶活性，请问你找到方法了吗shylook jackh ...
feroger 看了很多文献上测p-Rb，用的是actin做的内参，没用总的Rb，这是为什么呢kern6549 怎么能用总的Rb作为内参，看来你没有弄明白什么是内参！feroger 测磷酸化不是要和总的对照吗？像测p-AKT还要同时测总AKT，为什么很多文献上测p-Rb，而不测总的Rb呢？kern6549 为什么一定要和总的对照呢？测磷酸化的和总的意义是不一样的，你想得到哪一种信息就测相对应的一个。测磷酸化的是关心的是活化的有 ...
marker2007 心肌组织很难拿到，请问采用检测血液中MicroRNA水平来替代心脏组织的MicroRNA水平检测吗？谢谢！woxingwosu 肯定不行的，两者不一样。marker2007 楼上版主您好，我已检测2对心脏病患者的全血MicroRNA,结果发现hsa-miR-21与hsa-miR-26b在2次实验中均升高近2倍，面对这样的结果，我有点茫然，1）不知道分析hsa-miR-21与hsa-miR-26b的功能，二者 ...
luke_zou 应用什么软件能将多seq文件转换成fasta文件freecell http://www.insilicase.co.uk/Desktop/SeqToMultiFasta.aspxchenhaombb 直接把txt文件改了文件类型。luke_zou 多谢freecell！）tstsw chenhaombb wrote:直接把txt文件改了文件类型。我一般也是这么改的！daiti 这个软件帮我大忙了！本文由丁香园论坛提供，想了解 ...
天使的密码 我想研究camp/PKA/CREB信号通路在糖尿病模型大鼠中的作用，我能否用PKA抑制剂灌胃给模型鼠，但我看很多杂志上都是采用细胞培养的办法，活体试验给予这些抑制剂可以吗？没有经验，请问各位前辈。holywater 不一定是实验问题，有可能是买不起那么多的抑制剂吧kern6549 活体不能用抑制剂。可以用基因敲除小鼠。maldinilee 还是用体外细胞培养吧，同意楼上用基因敲除。tacitlee 这种方法不可行。首先 ...
2425611 刚刚开始做实验 请教一个关于质粒比较基础的问题，质粒转染细胞后，是同细胞内的基因相融合后表达还是仍以质粒的环形形式存在表达？每个转染细胞内转染进入的质粒数量是怎么样的啊？这个数量和蛋白表达多少有没有关系？还有个问题是请问现在最常用的质粒转染技术是什么？菜鸟级的问题，请大家积极帮忙，多谢！！wanadoo 两种转染。 酶切，基因相融合。非酶切，环形形式存在表达。我用lipofedaminwoxingwosu 2425 ...
termite42 近期做实验需要用到某一基因敲出或者过度表达的实验小鼠，不知道哪里能够购买到这种小鼠？谢谢各位指教～hebrewwolf 1.首先，问问南京模式动物所，如果那边有的话，很快就能搞定，代价一千块左右；2.其次，上JAX看看，从那边买的话，在有可供应小鼠的情况下，三到四个月可到手上，但代价可能需要3万人名币左右；3.还有，就是找具有这种小鼠的作者要，耗时和代价和从JAX买差不多。4.最后，最不济的方法就是需要自己 ...
borderland 搞临床的，不看基础很多年。书上说，微卫星DNA重复次数10-60，为啥么属于高度重复序列，高度重复序列不是重复次数达数百万次么？应该是中度重复序列才对。请专家拍砖borderland ?????borderland ????georgeli 晕:)freecell 参考此文： http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_shxmsytx200404001.aspx本文由丁香园论坛提供，想了解更 ...
lujunping 由于条件所限，标本只能放在-20度冰箱然后集中处理。请问，是否能够从组织中提取基因组DNA，然后通过RT-PCR的方法检测疾病组和对照组目的基因的表达水平吗？常用的方法都是抽提组织RNA然后逆转录为cDNA再检测的。谢谢！wangke80 基因组DNA和RNA是两回事，楼主首先得弄明白你们的研究目的是什么。表达水平肯定要用RNA了，基因组DNA不可能反应出两者之间的所谓表达水平。lujunping 疾 ...
flster 如果知道某染色体的某一区域，如何知道改区域及附近编码了那些基因。如：X染色体上起始位置为72928764，终止区为 72965791的一段DNA都编码哪些基因该如何查？woxingwosu NCBI上有查基因组序列的呀，自己学习吧yake211 在 ucsc 网上查找，不过你先要搞清楚你的数据版本是 hg18 还是 hg19, 不同的版本物理位置有一定的变化。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法 ...
西地兰的启迪 PPT的链接http://www.biomart.cn/experiment/430/586/587/30549.htm第十二张中，图片中有很多苹果、梨、柠檬，有些我认识是转录因子，那么这个图是要反映什么意思呢？想截个图在下面的，怎奈学校的网到了晚上真是破啊。。。。期待高手指教，谢谢噢~~~西地兰的启迪 图就是这个样子滴，还是早上的网络好，请大家帮忙看看哦～yuxiongying 说明上下游都受到多种转录因子的调控西地兰的 ...
syn2767 请教各位师兄，小弟想研究肿瘤中lncRNA-即长非编码RNA的情况，请问开始用什么方法，用芯片筛选吗，多谢freecell "研究肿瘤中lncRNA-即长非编码RNA的情况", 研究什么情况？wlh0369 我觉得应该先将lncRNA从总RNA中分离出来，再进行下一步研究yaoyao82986 你好，看到你发的这篇帖子是今年年初的，我现在也遇到和你相似的问题，请问你当时是怎么解决的？如何筛选出的lncRNA？非常感谢 ...
