琼琼qiongqiong 请问各位：买抗体和PCR试剂哪个公司好点？？？希望大家多多推荐，我是新手，没有经验！先谢大家 啊。biolinkphilic 这个看经费和采用的研究手段，以及对结果的要求综合起来再做决定吧。noforever_hh 我们的购买抗体做法是：1；实验室如有人用过，效果不错，就沿用。2；没人用过不了解，就查文献，级别高些的文章，看人家的结果，然后参考他们的试剂选择的公司。PCR的试剂现在很成熟了，几个大公司的都不错， ...
zaiju512 求Ca2+振荡产生Ca2+波通过缝隙连接传递的彩图！！谢谢！！zaiju512 急需！！！zaiju512 自己顶起！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming
xying316 站内的各位仁兄仁姐：请问有谁买过上海复蒙的细胞？质量如何，可以给点建议吗？非常感谢！zjubell 买细胞还是去上海中科院的细胞所吧。正规点。xying316 好的，谢谢zjubell本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming
noworrynoworry 请问各位前辈，Pyk2（Pyk2信号通路)有特异性抑制剂吗？哪里能买到？noworrynoworry 拜托各位，帮帮忙啊diwen FAK/ Pyk2 tyrosine kinase inhibitor (PF-562271)http://lifesciences.b-bridge.com/products/detail/1440/PF-562271_FAK;_RTKs_Kinase_Inhibitor不知这个公司有无国内 ...
myskite 将以构建的microRNA质粒稳转至细胞系，有人做过吗，分享一下。bioenw 我做过miRNA的稳转实验，我们可以进行交流。版主zhujoker留言:不要轻易留邮箱以及联系方式。可以站内PM，也不要变相打广告myskite 我已经构建了pcDNA3.1(+)-premiR的表达载体，正在准备细胞。据说，这个实验，细胞爱死？还有，用G418溶于培养液后，用滤吗？如何挑单克隆？wingofwind1029 我用pcDNA ...
gaimong 有一个问题想请教一下大家：已知一蛋白N端和C端部分氨基酸序列，如何从基因组中将目的基因克隆出来，并对表达产物进行鉴定？查了一下资料，好像说用简并引物PCR可以，不过对这种方法不太了解，所以也不太确定。希望有高手能指点一下，谢谢bigbang_0_0 用简并引物屁一下cDNAholywater 太简单了，查NCBI blast.,,本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...
miaoduan 如期，我要做wnt通路，欲用licl抑制gsk3β，licl溶液应该拿什么溶剂配置啊（三蒸水？PBS？）谢谢zmz_1 三蒸水可以，不是很容易溶解，然后过滤，一般避光4度保存使用。kailiang 楼主做得怎么样了？我也要做wnt方面的东西，想请教你的LiCl是怎么配的，设定药物浓度梯度的时候是怎么设的，还有楼主做什么细胞系。谢谢！观清 请问，我要做激活WNT经典信号通路，可以用licl抑制gsk3β来激活吗？本文 ...
yaqingxinlan 请问哪位知道Axygen的DNA甲基化的纯化试剂盒在哪里能买到？怎么联系，非常感谢，急急急急急honglian198410 推荐你用ZMYO的甲基化试剂盒，我们用的这个比较好，只需要改良一下他的protocoltyssxlth 我用ZMYO的做不出来，用传统的方法做出来了。贺龙23 请问怎么修改ZYMO公司的甲基化硫化试剂盒的protocol？hugasis 不采用半小时进行亚硫酸盐进行修饰，你真O ...
粘豆包 想研究药物减轻肝脏缺血再灌注并探讨细胞通路。请问有细胞水平的肝脏缺血再灌注模型如何建立？diving 看到有文章在细胞水平用低氧复氧 感觉是缺血再灌注模型的体现外科长征 我目前正在做johnyeungkc 细胞水平的I/R，我们实验室是通过缺氧/复氧来建立的，装置也是自己用乐扣的盒子自制的，chuckdouble 粘豆包 wrote:想研究药物减轻肝脏缺血再灌注并探讨细胞通路。请问有细胞水平的肝脏缺血再灌注模型如何建立？调整3 ...
苏小燕 18S rRNA是组成核糖体的一部分，想请教一下，在细胞核里有没有转录合成18S rRNA的DNA存在？slytjiaofei 这位战友，这种基础问题有空可以好好看看教科书，答案是当然有，而且是多个拷贝的！！！苏小燕 呵呵，让您见笑了，以前学临床，对这个不是很清楚，望多多指教！一维阿布 18S rRNA是真核生物的核糖体RNA，由DNA转录而来，真核生物的DNA除了线粒体DNA外都存在于细胞核，所以18S rRNA苏小燕 线粒体DNA指导合 ...
langtu 最近在找一个micrRNA的靶基因，种子序列并不完全互补，但是mRNA水平是有变化的，百思不得其解，偶然发现一篇综述写道“ 最近的一些发现表明，miRNAs 与它们的靶基因只有部分互补的情形也会导致mRNA 的降解，但是目前还不清楚，翻译抑制是否发生在mRNA 的降解之前”，大家有碰到这样的情况吗？有相关的文献可否分享一下holywater 互补导致翻译受阻也会造成翻译水平下降互补导致降解也会下降不完全配对也会可能互 ...
翩pian1 现在想用毒胡萝卜素诱导肝L02细胞内质网应激，但是没看到合适的文献怎样诱导，怎样评估，有没有高手，指点一下啊，感激不尽……yuanyu 我也在做这方面的研究，希望多多交流，互相提高。我的E-mail:fdliang0104@163.combatiwangna Tg不是内质网应激的阳性药吗？直接加进去好了，时间不要太长。因为它会降低GAPDH的表达hongfunv1984 我也是做这方面的，我做的是毒胡萝卜素的类似物， ...
小小学药者 因为实验室以前没做过干扰试验，所以对这块不是很懂。请大家帮我推荐下 哪家合成的比较好，价格也适当的 谢谢哈！另外甲基化的siRNA适用于哪类干扰呢？呵呵 不太懂问题如果很幼稚 不要笑话哦。。。。呵呵 谢谢bioenw 百恩维生物 www.biowit.combaby_susan 甲基化的siRNA，你是指2‘甲氧化学修饰吗，这个主要是保证siRNA转染进细胞或注射动物体内比较稳定小小学药者 baby_susan wrote:甲基化的siRNA，你 ...
leileicui 在看文献是发现这些问题：miR-23a RT GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACggaaatPCR sense GCGatcacattgccagggThe same antisense primer was used for all miRNA PCR : GTGCAGGGTCCGAGGT（问题，1所有的miRNA序列可以用同一个反义序列吗？问题2：这里的正义和反义引物是不是就是其他文章中提及 ...
tank1978 请问有人知道什么叫immunoslot blot（ISB）技术吗？ freecell ISB就是狭缝杂交，就是把反应物加到一个长方形的孔内，然后进行混合及显色。通常96孔板上的孔，都是圆的，或者你点个样在滤纸上，叫做点杂交，即dot blot；这种长方形的反应孔内进行的杂交，就叫slot blot。tank1978 学习了。。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...
悬崖上的牛仔 请教各位，这个microRNA 在该细胞内本身就有，只是表达不稳定，有什么方法可以让这个microRNA 持续表达呢？holywater 表达不稳定也是一种机制，我觉得去研究为啥不稳定更好一些，只是个人意见俄！yz2003can 将microRNA克隆到慢病毒载体，包装病毒，构建稳转microRNA细胞系。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号 ...
sophia1842 哪位好心人，能不能提供一下鼠源的SRY基因（Y染色体上的一个基因，可以区分性别），普通PCR的引物，我找了好几对都不行啊，感谢啊freecell 在google scholar内搜索nature、 cell上面的引物。sophia1842 我找的引物，基本都是08年以后，影响因子7以上的啊woxingwosu 呵呵，那是不是你的系统有问题呢？不可能这么多影响因子7以上的文章的引物都不行吧？本文由丁香园论坛提供，想 ...
huangdde 如血管内皮生长因子（VEGF）与其受体（VEGFR）结合后，会刺激细胞增殖，如下现象是否可以出现：某种物质与VEGFR结合后，该物质会通过VEGFR而抑制细胞增殖？谢谢。holywater 一般来说受体结合是比较特异的，但是可能和结构类似的东西结合而促进或者抑制受体的活性，这也是竞争性抑制剂的来由。不过抑制剂不是“配体”，所以我说楼主的定义可能有些错误。huangdde 谢谢。哪请问：同一种物质，是否可以与不同 ...
jasedm 看到文献好多都说，某蛋白被磷酸化，其活性增高，继而磷酸化下游的信号分子。AKT激酶活性测定和Western blot检测其磷酸化水平两者都能说明AKT的活性吗？有什么不同吗？两者有没有可能测定出来的结果不同？例如说AKT磷酸化水平没变化，但是激酶活性检测结果是活性降低？AKT磷酸化就代表它有活性吗？谢谢高手指点xiaoxiao53 很有价值的问题，AKT磷酸化就应该是有活性吧阿兰梦 测活性和测磷酸化的蛋白表达 ...
leileicui 如题，因为新手没有做过实验，所以请高手详细指点，如果有比较好的文章可以推荐给我，谢谢。为了方便讲解，以mir127为例，逐步讲解，谢谢leileicui 自己顶一下。freecell 这个你可以在google scholar里面搜索这个miRNA的qPCR引物，太多了。可以借鉴nature、science等文章中的引物和探针。其次可以自己设计，例如： http://www.exiqon.com/miRNA-qpcr-d ...
