【讨论】关于miRNA定量PCR时引物的一些迷惑，希望高手来指点

在看文献是发现这些问题：
miR-23a RT GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACggaaat
PCR sense GCGatcacattgccaggg
The same antisense primer was used for all miRNA PCR : GTGCAGGGTCCGAGGT
（问题，1所有的miRNA序列可以用同一个反义序列吗？
问题2：这里的正义和反义引物是不是就是其他文章中提及的forward和reverse）
问题3，有些文章中只有forward,和reverse引物，未见反转录引物列出，是作者漏掉了，还是根本不需要反转录引物？上述问题希望高手来指点一二。越详细越好，衷心感谢

还有一个问题，对于不同的物种，如鼠源的与人源的miRNA分子的荧光定量PCR及反转录引物是不是不同啊，可以通用吗？

你先了解一下miRNA定量的原理就知道了。
他是一个茎环引物，用于逆转录，这个是特异性的，不同来源是不一样的。
然后做扩增时，一段是特异性的forward引物，另一段是一样的revearse引物，与茎环正好match。
所以针对你的问题
1.所有反义引物可以相同（主要看你用的是什么茎环）
2.是的
3.反转录引物有可能是作者不愿意透露，或者他自己根本不知道。很多公司是不透露序列的。知道序列后，可以自己直接去合成，但如果不做成茎环，可能效果会稍差些。

能否问下人的反转录引物中茎环序列是什么？反转录温度是多少？
非常感谢，学习了

不同的来源指的是不同的物种？还是有多种可以选择的茎环，能否详细说明，或者给相关资料查看，谢谢

这种问题仍然回答不了。
人的miRNA有几百种，每一种都特异性的。
又不像mRNA那样，可以用随机引物或oligodT直接逆转的。

http://www.mirbase.org/index.shtml，你在这个网站查下你所需要的miRNA序列，就可以看到颈环结构的序列了，反转录温度应该考虑的因素应该很多，比如引物序列等。你可以加QQ1095801973.我们讨论下

再次请教，miRNA定量PCR时，内参需要单独设计反转录引物吗？

一般逆转录试剂有通用RT引物，pcr的反向引物也有通用的，但正向引物则是特异性的，需要设计。可否告诉我一下你问题中涉及的文献。