扫描电子显微镜最基本的成像功能是二次电子成像。它主要反映样品表面的立体形貌。由于样品的高低参差、凹凸不平，电子束照射到样品上，不同点的作用角不同，因此造成激发的二次电子数不同；再由于入射方向的不同，二次电子向空间散射的角度和方向也不同，因此在样品凸出部分和面向检测器方向的二次电子就多些，而样品凹处和背向检测器方向的二次电子就少一些；总之，样品的高低、形状、位置、方向等这些与表面形貌密切相关的性质，变成了不同强度的二次电子信息。电子束逐点扫描产生不同数量的二次电子，依次在荧光屏上显示出亮暗不同的点，也就是相应的像素。再由这些象素组成了完整的二次电子图像。1、荷电效应当入射电子作用于样品时，从样品上会发出二次电子，其发射率会随入射电子的加速电压而变化。图1是表示二次电子发射率随入射电子的加速电压变化的曲线，图中横轴V0 表示入射电子的加速电压，纵轴σ表示二次电子发射数与入射电子数之比，即σ=二次电子发射数/入射电子数。 图1 二次电子发射随加速电压变化曲线从图1 中可见，只有在V0=V01和V0 = V02时,σ等于1 ，即入射电子数与二次发射电子数相等，此时样品既不增加电子也没有失掉电子

相关专题 在本章节我们解释了转染体系的关键组分对细胞转染 实验的效率有何影响，并且合理的给予您一些关于如何使它们更有利于您研究方面的提示。 【组织培养试剂】 一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM )。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质，如HEPES，当暴露于光照下就会分解产生细胞毒性物质。 酚红试剂可保护细胞免受一些HEPES降解所产生的毒性效应，但在使用未加酚红试剂的培养基的应用场合下，如荧光素酶的测定，细胞毒性则仍然是一个问题。 胎牛血清—血清是一种含有白蛋白、球蛋白、生长促进因子和生长抑制因子的极为复杂的混和物。采集血清所用动物的年龄、营养水平、和健康状况可影响到血清中这些成分的数量和质量。因此血清易受显著生物学变异的影响。

一、形态学鉴定 1. 在倒置显微镜中直接观察活细胞的形态学特征2. 细胞染色检查 ：a) 将无菌玻片置于细胞培养皿中，加细胞悬液后培养；b) 待细胞长满玻片后取出，用PBS清洗，之后放于载玻片上，待其自然干燥；c) 用PBS/甲醇（1:1）固定15分钟；d) 弃固定液，加合适的染色液染色；e) 染色完毕后用清水洗净，置于空气中干燥，f) 干燥后，用二甲苯透明，光学树脂封片后观察。二、免疫组织细胞化学鉴定1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片；2. PBS清洗标本3次，各1 分钟；3. 4%多聚甲醛固定15分钟；4. 置于空气中干燥；5. PBS清洗标本3次，各2 分钟；6. 0.5%Triton X-100孵育 1次20分钟；7. PBS清洗标本 3次 各2分钟；8. 3%H2 O2 孵育 15分钟；9. DPBS清洗标本 3次 各2 分钟；10.

实验目的 掌握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理 实验原理 小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂能力，本实验采用这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 实验原理 制备方法包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处 2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上 3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象 实验用品 1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子 玻璃吸管 10ml刻度的 离心管 离心机 载玻片 盖玻片 显微镜 滤纸 擦镜纸 纱布 恒温水浴锅 3．药品：0.01%秋水仙素 0.075MKCl

一、标本采集 由于BNP和NT-proBNP很少受体位改变和日常活动影响发生变化，故不存在日间波动，因此采血无需固定体位和时间。但糖皮质激素、甲状腺素、利尿剂、ACEI、β受体阻滞剂、肾上腺素拮抗剂等都会影响血浆BNP的浓度，因此心衰患者应该在药物治疗前采血测定BNP的基础值。怀孕的最后三个月和分娩后即刻BNP水平亦可升高，但围月经期BNP无明显变化。BNP只能用EDTA抗凝血浆测定，NT-proBNP可以用EDTA或肝素抗凝血浆或血清测定，只是EDTA抗凝血浆测定结果要比后两者低10％左右。NT-proBNP在血清、含aprotinin血清及EDTA抗凝血浆中25℃可稳定3天，4℃可稳定5天，-20℃和-70℃至少可稳定6个月。BNP在25℃2小时即下降20％，4℃可稳定8小时。因此采集标本后应尽快检验|地带网搜集整理离心测定，以免测定结果受BNP降解的影响。 二、测定方法 IRMA法灵敏度和特异性高，且不需要分离纯化血浆，比RIA法快捷实用，但仍需花费5～36小时，不适用于全自动分析系统。Abbott公司推出的BNP试剂采用双单克隆抗体、微粒子酶免疫法（MEI

以TCR―pMHC为主的多种跨膜分子能够聚集在是它们在T细胞胞膜脂双层结构中有序移动和聚集的结果。上面提到，起关键作用的是细胞骨架(cytoskeleton)。细胞骨架由微管、微丝和中间丝组成，是一类高度动态化的可随生理条件改变而不断进行组装和去组装的结构，受到细胞内外各种因素的调控。由肌动蛋白(actin)组成的微丝(microfilamint)，以及调控肌动蛋白构型、行为的微丝结合蛋白如肌球蛋白(myosin)，积极参与免疫突触的形成。两方面的信号转导与细胞骨架构型的重排有关。 TCR-pMHC信号转导通过T细胞骨架蛋白重排诱导免疫突触形成 首先涉及左下方的肌动蛋白多聚化调节分子RhoA，这是TCR识别MHC提呈的抗原肽后，借助蛋白酪氨酸激酶Fyn和Lck等激活ZAP-70，后者且通过IrAT招募SLP-76和NCK等一系列衔接蛋白，使鸟苷酸置换因子Vavl磷酸化后所激活的主要分子。二是LFA-1分子胞内段可结合一种连接质膜与细胞骨架的踝蛋白(Talin)的分子，共同参与肌动蛋白构型的变更。另外微管组织中心(MTOS)对微管装配的调节，也可改变胞内的细胞网状支

单核细胞只占末梢血白细胞的3%～5%，比重与淋巴细胞近似，用离心的方法很难将二者分开。而利用贴壁法也很难将两者分开，且有损伤细胞及回收率低等缺点。现可用以下两种方法获得量较多且纯度较高的单核细胞。 1.Colotta方法 [试剂及配制] (1)pH 7.2 PBS液 (2)聚蔗糖-泛影葡胺分层液(D=1.077) (3)10%小牛血清，25mmol/L HEPES RPMI-1640培养液(pH7.2) (4)46% Percoll液。 [操作方法] (1)将用PBS稀释5倍的肝素抗凝血40ml，叠加在10ml分层液上，室温离心，2000r/min 20min； (2)吸出外周血单个核细胞层，用PBS离心洗2次，再用PBS悬浮； (3)底速离心500r/min ，10min，除去血小板，于沉淀中加入10%小牛血清，25mol/L HEPES RPMI-1640培养液，配成5ml的悬液； (4)将其叠加在5ml 46%的Percoll液之上，室温离心2000r/min， 30min后，得到3个带：第1带为富含单核细胞层(83%)；第2带也有少量的单核细胞；第3带

摘要：基因芯片是在承载基片上，通过微加工技术构建不同的基因片段阵列，可用于比较正常/病变组织或药物作用前后基因表达的变化，从而发现疾病相关基因作为药物靶标；亦可确立病原体,指导临床药物治疗。目前已用于感染性疾病和抗生素抗性基因的筛选、肿瘤药物靶标的确立、内分泌激素药物筛选及毒理学方面的研究。综述了基因芯片和药物筛选的概念、在药物筛选中的应用及其发展趋势。21世纪是生命科学的世纪。随着人类基因组计划的实施和完成，基因工业也迅速发展并方兴未艾，基因芯片就是在这种背景下发展起来的一项高新生物技术产业，其发展速度和应用前景令人鼓舞，应用范围也非常广泛，基因芯片在药物研究中的应用主要为两个领域，其一是药物筛选，其二是指导临床合理用药。本文仅就基因芯片在药物筛选研究中的应用和发展趋势作一简介。

一、实验动物的环境实验动物生长发育、繁殖交配所赖以生存发展的特定场所和外在条件，称为实验动物的环境。可将其分为外部环境(Outside Environment)和内部环境(Inside Environment)。(一)外部环境指实验动物和动物实验设施以外的环境。在开放饲养条件下，外环境的变化直接影响内部环境。(二)内部环境指实验动物和动物实验设施内部，即动物直接生活的场所。内部环境又可分为内部大体环境和局部微环境。(1)实验动物内部大体环境 即设施内部大环境，是设施建造时所必须考虑的各种环境控制指标标定范围。(2)实验动物局部微环境 是指特定的、个别的或少数实验动物所生活的微小巧境，包括实验动物笼盒结构款式，所处的位置、垫料的种类以及实验动物的密度等。二、实验动物设施外部环境因素实验动物设施外部环境与实验动物生活的区域的经纬度有关系，而且随季节的变更而变动，即使在一昼夜内，外部环境也有很大的变动，比如凌晨与中午外部环境的多项指标变化都很大。(一)温度外环境温度随季节交替而变动，并与设施所处的地理位置相关联，即使在一昼夜内温度也有很大变化。一般而言，冬季寒冷、夏季炎热，北方气温普遍低

原理 叶绿素是一种二羧酸酯，在碱作用下，发生皂化反应；在弱酸作用下，叶绿素中镁可被H取代而成为褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，叶绿素具有荧光，故从与入射光相垂直的方向观察叶绿素溶液呈血红色。叶绿素的化学性质不稳定，易受强光氧化，特别是当叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。 器材与试剂 器材：FS分液漏斗、移液管、试管与试管架、量筒、烧杯、酒精灯、滴管、药匙等。 试剂：石油醚(60-90℃)、醋酸铜粉末、醋酸、KOH的甲醇溶液(30gKOH溶于甲醇定容于100ml)、醋酸铜的醋酸溶液(6g醋酸铜溶于100ml50％醋酸溶液中)。 方法与步骤 1.用石油醚萃取丙酮提取液中的叶绿体色素。在用丙酮从鲜叶中提取的色素粗提液中不仅含有叶绿体色素，而且还含有可溶于丙酮的其他化合物。为了使被分离崐色素更好地用于理化性质的观察，须把丙酮提取液中的色素转移到石油醚中，具体方法如下： 将丙酮提取液倒入分液漏斗中，加等量或半量的石油醚(沸点为60-90℃)，用力振荡后静置，待分层清晰后弃去丙酮层。加蒸馏水洗石油醚3-4次，轻轻摇动

【实验目的】 通过实验掌握琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理与方法。【实验原理】 琼脂糖是从海藻中提取出来的一种杂聚多糖，是由D型和L型半乳糖以α-1，3和β-1，4糖苷键相连形成的线状高聚物（如下图所示）。琼脂糖遇冷水膨胀，溶于热水成溶胶，冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的凝胶。琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段最为常用的方法之一，这种方法简便易行。而且琼脂糖可以灌制成各种形状、大小和孔径，在不同的装置中进行电泳，如果有必要，还能够从凝胶中回收DNA谱带。琼脂糖凝胶的分离范围较广，选择不同凝胶浓度和装置，从50个碱基对到几兆不同长度的DNA都可以实现分离。使用电场强度和电泳方向恒定的水平板琼脂糖凝胶电泳的方法，可以很好的分离长度在50-20,000 bp 的DNA片段。DNA在琼脂糖凝胶中的迁移率受多种因素影响。例如DNA分子的大小；琼脂糖的浓度；所加电压等等。DNA片段越长，泳动速度越慢，而且泳动速度与电场强度成正比。一个给定大小的线性DNA片段，在不同浓度的琼脂糖凝胶中迁移率不同，DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。用低浓度的荧光染料如溴化乙啶染色后，凝胶

线性试验是衡量一个方法的检测范围的一种实验。通过线性试验，可以了解该方法的最高检测值和最低检测值，可确定该方法的检测范围，以防止含量过低或过高样品的检测误差。线性范围内某物质的浓度和吸光度应该是成正比例的，符合Beer定律，故在此范围内所测得结果应该是可靠的，超出上下限值的结果是不可靠的，为使结果可靠，遇到这种情况应加大样品用量或稀释样品后再次检测。线性试验的方法基本同标准曲线的制备将高浓度的样本分别制作成10种阶段的稀释品后每份进行2次测定，确认高浓度测定的可能范围。不同的是系列标准液的浓度范围较宽，所测标准管的个数多。一般先进行线性试验，然后在线性范围内制备标准曲线。 试剂项目的线性范围主要取决于工具酶的浓度，而主要的工具酶的浓度决定了试剂的成本价格。某些国产试剂的工具酶普遍较低，因而线性范围很窄，价格也比较低。而SYSMEX的试剂中的工具酶含量较高，线性范围很宽，价格也比较高。临床上检验科的主要任务不仅要检测结果正常标本，最主要是要在第一时间检测出结果异常的标本，对临床的诊断和疾病的预后情况监测才能更有帮助。 SYSMEX的肌酐试剂中工具酶的成分比国产试剂的浓度都要高，R

神经纤维的兴奋表现为动作电位的产生和传导，神经干在收到有效刺激后可以产生动作电位。 神经的兴奋部位对于为兴奋部位来说呈负电位，两者之间存在电位差，因此可以用电极加以引导。 如果在神经干的另一端安装电极，可以引导出双相的动作电位；而如果在两个引导电极间损伤神经，则引导出的动作电位为单相动作电位。神经细胞的动作电位是“全或无”的，而坐骨神经干由许多不同类型的神经纤维组成，所以引导出的神经干动作电位是复合动作电位。 此复合动作电位的幅值在一定的刺激强度范围内随刺激强度变化而变化。将神经屏蔽盒、信号线和计算机连接好，取一根坐骨神经干标本小心搭在神经屏蔽盒内的刺激电极和引导电极上，确认神经与各电极接触良好，屏蔽盒盖接地。 1） 神经干兴奋阈值的测定 刺激强度从0.1V开始，逐渐增大刺激强度，观察所记录的曲线变化情况，当刚刚出现动作电位时的刺激强度即为蛙坐骨神经干的兴奋阈值。注意在图像上区分刺激伪迹与真正的动作电位。 2） 双相动作电位在刺激阈值的基础上继续加大刺激，观察动作电位的波

随着大数据时代的到来，医药、材料、化工等行业的研发领域在产品生命周期管理所面临的提高创新能力，提升效率降低成本，加强风险控制方面的压力和问题越来越多，亟待信息化的解决方案。从研发项目的管理，研发数据的管理，实验室信息化管理，科研工作保障相关的试剂、仪器等的管理等方方面面，如何建立健全信息化平台，走可持续发展信息化之路？这些问题是国内研发企业迫切希望了解和借鉴的。 制药领域研发信息化综合解决方案 目前大多数研发企业或多或少都具有现行的科研项目管理系统，人员管理系统（一般指OA系统），企业资源管理系统（ERP）。然而，对于研发实验相关的数据管理、研发工作相关的实验试剂、仪器等信息缺乏精细化的管理。另外，不断完善的信息化系统如何与既有的系统完好的整合，以避免形成越来越多的信息孤岛，真正的将各系统产生的数据进行资源整合及数据挖掘，形成企业的知识库，也是企业信息化发展所关注的重要问题。BIOVIA在研发领域具有完整的信息化解决方案，集中的数据库管理，各系统之间能够进行无缝整合，国内外医药、材料、石油化工、快速消费品等行业都采用了BIOVIA实验数据管理系统的解决方案。研发型企业一般以

一、目的 学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 二、原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酶蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后，便可得到纯的酪蛋白。 三、器材 1．牛奶 2．离心机 3．抽滤装置 4．精密pH试纸或酸度计 5．电炉 6．烧杯 7．温度计 四、 试剂 1．95%乙醇 2．无水乙醚 3. 0.2MpH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液 A液：0.2M醋酸钠溶液 B液：0.2M醋酸溶液 称有机纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g,定容至1000ml 4.去A液1770ml,B液1230ml混匀，即得pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。 5.乙醇乙醚混合溶液：乙醇:乙醚=1:1（V/V） 五、操作 1.将100牛奶加热到4℃。边搅拌边缓缓加入预热至40℃的缓冲液，并调节

一、实验目的 1.了解过氧化氢酶的作用，掌握常用的测定过氧化氢酶的方法。 2.了解过氧化物酶的作用，掌握常用的测定过氧化物酶的方法。 二、实验原理 氧化物酶是植物体内普通存在的、活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化在过氧化物酶催化下，H 2 O 2 将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470nm 处有最大光吸收，故可通过测470nm 下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性(愈创木酚法)。 过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系。过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。 因此，可根据H 2 O 2 的消耗量或02的生成量测定该酶活力大小。 在反应系统

植物细胞的后含物 　　细胞在生长分化过程中，以及成熟后由于代谢活动产生的贮藏物质或废物统称为后含物。后含物有的存在于液泡中，有的存在于细胞器内。在后含物中主要是贮藏物质，其中以淀粉、糖、脂类和蛋白质为主。排泄物常为各种形状的晶体。 　　（一）淀粉粒 　　淀粉是一种最普通的后含物，在质体中发育成淀粉粒。在植物界中淀粉是仅次于纤维素的一种丰富的碳水化合物。 　　观察淀粉粒的理想材料是马铃薯（Solanum tuberosum）块茎。在块茎中有大量的薄壁组织细胞，细胞中含有丰富的淀粉粒。观察时只要用解剖刀在切开的块茎表面轻轻刮一下，将附着在刀口附近的混浊汁液放在载玻片上，加一滴水放上盖玻片即可观察。 　　用低倍物镜观察时，在视野中可以看到不同大小的颗粒团，选择颗粒不稠密而且互不重叠处，用高倍物镜观察。由于淀粉粒未经染色，需要调节光圈大小和细聚焦器才能观察清楚。当焦距对准，光圈大小合适时，可以看出椭圆形的淀粉粒有明暗交替的同心圆花纹，而且围绕着一个中心，这个中心叫做脐点。马铃薯的脐点不在中央而是偏心的。 　　在视野中除了具有一个偏

金标法是Faulk和Taylor（1971）提出的，并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质，使其与抗体相吸附，从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时，在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色，不需加外进行染色。在电镜水平，金颗粒具有很高的电子密度，清晰可辨。因此，免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面，并取得了要喜的进展，解决了一些过去未能解决的问题，80年代以来似有取代免疫电镜PAP技术的趋势。胶体金标记抗体技术在电镜水平应用有许多优点：首先，手续不如PAP法烦琐，不需用H2O2等损伤微细结构的处理步骤，对微细结构的影响较少。其次，金颗粒具有很高的电子密度，在电镜下金颗粒清晰可辨，易于与其他免疫产物相区别。因此，金标法还可以和PAP法相结合进行双重或多重染色的超微结构定位。另外，利用不同直径的金颗粒标记不同的抗体，是研究突触小泡内神经递质共存的有力工具。由于抗原抗体反应部位结合金颗粒数量的多少可进行粗略的免疫细胞化学定量研究。金标抗体还可加入培养液中，对培养细胞内抗原进行标记定位。曾有报告用金标记法于细胞内骨架的研究获满意的效果。由于金具有强烈的

1、多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）：用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物～。 2、单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAb）：由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异性强、效价高、少或无交叉反应性。 抗体制备技术 一、多克隆抗体制备 （一）免疫原的制备 （二）免疫动物 （三）免疫血清的纯化 （四）免疫血清的鉴定 （五）免疫血清的 二、单克隆抗体制备 （一）单克隆抗体制备原理 （二）单克隆抗体制备的技术要点 （三）影响杂交瘤技术的因素（四）单克隆抗体的应用 三、基因工程抗体技术 （一）人源化抗体 （二）小分子抗体 （三）双特异性抗体 （四）抗体库技术 多克隆抗体制备 （一）免疫原的制备 免疫原（immunogen）指能刺激机

用于流式细胞 仪检测的常用荧光素有FITC、TRITC、Cy3、Cy5，PE和PI，在以上各种荧光染料中，PE荧光最强，适用于弱表达抗原；FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广。 1．直接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液（浓度约1×106 个/ml），直接加入荧光素标记抗体进行免疫反应（如做双重标记或多重标记染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入）。4℃孵育15～30分钟后，用1/15mol/LPBS（pH 7.2～7.4）洗1～2次，加入缓冲液重悬，上机检测。 本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直接荧光抗体标记试剂成本较高。但减少了间接标记法中较强的非特异荧光干扰，因此更适用于临床标本的检测。 2．间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液（浓度约5×106 个/ml），加入特异性第一抗体，4℃孵育15～30分钟，待反应完全后用磷酸缓冲液洗去未结合抗体，吸尽残留液体，再加入荧光标记第二抗体，4~C孵育30分钟，生成抗原―抗体―抗抗体复合物，洗涤后即可上机检测。注意：在整个荧光标记过程中均需参考免疫荧光细胞化学间接法染色程序