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做了 5 年 MTT 实验,跟你分享几点心得体会

做了 5 年的 MTT 实验 ,耗费了上万块 96 孔板。有成功的喜悦,有失败的沮丧,有好多话要对各位实验同仁说。在这之前,我们先回顾一下 MTT 的原理及操作步骤。实验原理MTT 是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 C 的作用下,生成蓝色的 formazan 结晶。formazan 结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失,不能将 MTT 还原,无法形成结晶),且该结晶溶解于 DMSO。利用酶标仪测定波长 490 nm 处的光密度 OD ...

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两个蛋白的爱情:GST pull-down 这件小事

大家好,我是红领巾。下面我要讲述的是一个没有小三的故事,一个只有两个蛋白的爱情。首先简要介绍一下 GST pull-down 技术,高大上的说法是通过已经标记的 GST 标签蛋白,从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白,用以确定已知蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用关系。通俗地讲就是 GST 标签的 A 蛋白(GST-A)与另一标签的 B 蛋白(作者君用的是 His 标签纯化的体外蛋白 His-B)是否相爱的故事。从细胞裂解液中钓出与之相互作用的蛋白,作者君称 ...

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神队友 or 猪队友?起底第三方投稿机构

自 2015 年 3 月起,Springer、Elsevier 等国际出版集团的 4 批集中撤稿中,涉及中国作者的论文有近 200 余篇,其中 Springer 旗下的《肿瘤生物学》就撤稿超过 100 篇,撤销原因大多是论文在同行评审报告中造假。大部分作者委托第三方中介机构代为投稿,而恰恰是这些第三方机构通过冒用本领域专家的名字申请邮件地址,在专家不知情的情况下,用虚假邮箱向期刊提供正面夸赞论文的审稿意见。图 1 人民名义中关于高校科研领域存在的潜规则的一段对话买版面 ...

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当顶级期刊封面遇到中国风

说到中国风你会想到什么?青花瓷、水墨画、大熊猫、万里长城、太极 Kongfu、龙凤、鸟巢、哪吒、孙悟空...... 近些年来,它们陆续出现在各大顶级学术期刊的封面上,让世人新奇,让国人自豪!今天就来看下有哪些中国神兽已上线。01 青花瓷镶龙青花瓷镶龙,龙绕神舟,《Nature》聚焦中国科学专题,论中国科学的腾飞进步与发展。主页链接http://www.nature.com/news/science-in-china-1.2009402 双龙戏火珠喜 ...

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博士后的出路?看完这篇文章就有底

又到了博士毕业的小伙伴们纠结人生该何去何从的时候了。对于一心想做科研的理工科生来说,申请一个好的高校的博士后,再从讲师或者副教授做起无疑是大部分人的选择。那么,国外 vs 国内,牛逼学校 vs 地方普通高校是怎么样一个情况呢?笔者按照国外牛校、清北、C9 高校、985 高校、211 高校和普通一本的顺序对博士后人才招聘(偏生物医学方向)做了一个基本整理,希望可以给大家提供参考。1、国外名校学校招聘要求待遇哈佛医学院五年以上实验室经历;有相关 ...

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盘点史上最奇葩的国自然评审意见

8 月 17 日,国家自然科学基金委员会网站发出通告,公布了 2017 年度国家自然科学基金申请项目评审结果。每年中榜是少数,失意者是多数(资助率与往年一样在 20% 左右)。中奖的自是满心欢喜,不中的也只能厉兵秣马,根据专家的评审意见好好完善,以备来年再战。然而,不得不提的是,有些专家评审意见却让人啼笑皆非。总而言之,这些文人相轻的酸语、中肯内行的评价,还有语焉不详的太极废话融汇而成了一条条奇葩的国自然评审意见。笔者总结了一些国自然的奇葩评 ...

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有了这套写作模板,英语渣渣也能写好 SCI

施一公教授曾说:作为一个科研工作者,在国际学术期刊上发表科研论文是与同行交流、取得国际影响的必经之路。有些国内的科学家,实验做得漂亮,但常常苦恼于论文的写作力不从心,成为国际交流的一大障碍。我在不同的网络平台,不止一次看到过施一公教授总结的关于提高英文写作能力的经验分享,核心思想就是每天坚持读英文报纸,坚持数年,英文能力必然能够有非常大的提高。但是,时间不等人,我们很多时候没法积累数年,等到英语水平达到大师级别才 ...

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论文造假又现身,学术纠错何时了?

2017 年 8 月 31 日,山东烟台毓璜顶医院呼吸内科邹慎春为第一作者和通讯作者 Yao Zhang 在《分子医学报告》(Molecular Medicine Reports)发表题为《Epicatechin induces apoptotic and autophagic cell death in NCI-H2172 non‑ small cell lung cancer cells along with concomitant mitochondrial membrane potential loss and cell cycle ...

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如何查阅文献引用次数

9 月开学了,对于研究生来说注定是忙碌的一个时间段,因为要开始弄国基的标书了,博士生要思考老板标书的内容,硕士生也不会闲着,帮老板弄各种各样的材料。其中最烦人的估计就是整理老板的论文引证报告了(有钱去让图书馆查新的除外)。这里是针对那些发很多小分和各种杂七杂八灌水的文章然后又不舍得花钱让图书馆查新的老板来说的,当然顺便吐槽下我们这边的图书馆收费贼贵,当然每个地方的收费也是不一样的,废话不多说,直接进入正文。论文引证 ...

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基因克隆的流程

研究某个 gene 的功能通常要做相关的功能实验,常用的手段有 gain-of-function,涉及 gene 的过表达,在下文中即将讲述;还有 loss-of-function, 通常涉及 gene 的 knock-out 或 konck-down,暂且不提。今天准备跟大家分享一下如何成功地用传统酶切酶连的方法克隆某 gene 的经验,虽然现在同源重组的方法已经越来越广泛地应用到科研中,属于 technology based innovation,给实验带来极大便利。但是传统 ...

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在 Science 这样的顶级期刊发文,能拿 100 万奖金?

今年 6 月,四川农业大学对陈学伟和李伟滔的研究团队进行了表彰,发出共计 1 350 万元的奖励和支持经费(其实奖金不多,只有 50 万是给团队的奖励)。随后,媒体对此进行报道,网络上也掀起了一篇《 Cell 》论文值不值 1 350 万的讨论。诚然,中国会给在顶级期刊发表文章的科学家一定的奖励,相信大家早已习以为常。然而,Science《新闻》在此前的报道显示,奖励顶级期刊发文的科研工作者不是中国的专利,其实很多国家或地区都会有相似的激励政策。图 1 Science《新 ...

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大龄生物女博士的求职攻略

「二十一世纪是生物的世纪」,应该很多人都是被这句话骗进了生物这个巨坑。生物作为一个劳动密集型行业,注定了是需要大批生物民工来干活的,而当大批生物学子们到了毕业求职之际,发现寻找一份合适的工作成为一个困难的事情。所以才有人说在任何一行都能见到学生物专业的学生,这在某种程度上也算是符合了那句「二十一世纪是生物的世纪」。作为一个国内生物土博,本科学校非 985、211,研究方向偏基础,而且是女的,手头上也没有几篇重量级大文 ...

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实验时间|大肠杆菌转化实验

大肠杆菌转化实验有热击法、CaCI2 转化法、一步法、高效率电转化法,今天主要来讲下热击法。1 原理质粒 DNA 或重组 DNA 粘附在细菌细胞表面,经过 42°C 短时间的热击处理,促进吸收 DNA. 然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基因表达,就可以在含抗菌素的培养基中生长。2 实验步骤☞ 实验材料准备1. 器材旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5 ml 微量离心管,双面微量离心管架,干式恒温气浴(或恒温水浴锅),制冰机,恒温摇床,培养皿(已铺好固体 LB ...

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谁给女博士的就业挖了坑?

此前,有关女博士就业的问题在科学网上引起了热议,细品各方评论,总结起来就是女性就业存在某种程度的性别歧视,部分人士觉得不公,部分人士认为合理而已。图 1 科学网上对女博士就业问题的热烈讨论诚然,相比于男博士,女博士在就业过程中会更加经常地受到不公正的待遇。同样的论文水平、同样的学习经历,用人单位有较大可能会优先留下男生,缘何如此?原因一般有如下两条。1 生育歧视图 2 女博士在求职过程中的生育歧视用人单位常常会将女性的婚育情况作为 ...

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临床医生论文中最常犯的 5 个统计学错误

编者按:临床医生并非科研出身,论文上经常会出现多多少少的「小问题」。丁丁班主任今天带来一篇大盘点,指出临床医生论文中出现的常见错误。1 忽略了样本纳入量的计算和说明对于一个研究而言,一般而言先要计算样本纳入量,否则做出来的研究极有可能没意义。笔者曾经接到过一位麻醉学博士的求助电话,叙述他在预答辩环节,被问「为什么你的研究 A、B 两组选择这么多例老鼠」时,他答不上来的焦虑。而当这个问题被临床流行病学方面的专家问到时,基本上文章 ...

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最全的 MTT 实验经验大汇总

做 MTT 走了不少弯路,后来看了很多的资料,再做的时候结果好了很多。因此特别将有用的内容整理出来,分享给大家。可以点击阅读原文查看完整版。实验前应明确的问题1. 选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96 孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有 100000 个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定实验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样, ...

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EndNote 标注不这么做,导师修改时怕是要气哭

辛辛苦苦完成的论文,自己认为「不能增减一字」后,让导师修改。论文中必然带有文献标注,最常见的是 EndNote。不过导师电脑上没有你的 EndNote 库,那么他在修改时,只要有文献位置发生变化,EndNote 就会出现各种错误提示,会使你的导师修改兴致大减,或者直接把你的 EndNote 论文标注给删了,自己加个括号,叫你以后自己添加。如果你的文献数量在 30 篇以上,论文又有大改动,估计你会校对得发疯。What?你想叫导师在他的电脑上也装上你的 ...

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震惊:原来诺贝尔生理学或医学奖的幕后推手是他们……

众所周知,2017 年诺贝尔生理学或医学奖授予了杰弗理・霍尔(Jeffrey C. Hall)、迈克尔・罗斯巴殊(Michael Rosbash)和迈克尔・杨(Michael W. Young),以表彰他们发现了控制昼夜节律的分子机制。俗话说,默默做出贡献的「生物」有很多,但是,站上诺贝尔生理或医学奖领奖台的,终究只有三个「高等生物」而已。成功男人背后总是站着一位默默支持他的女人,而获得诺奖的学界大佬背后却飞舞着一群聒噪的果蝇~可能是完整的,哦,也 ...

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看到这个神插图,我笑了

一篇好的论文通常少不了「优质」的图片。一张好的图片胜过千言万语。当然如果图片是在摘要的位置,图片的选取则更加关键。研究生阶段相信大家的文献阅读量都是相当巨大的。但是总有一些文章剑走偏锋,不按套路出牌。当然,这种文章的插图也是着实精彩,给人眼前一亮的感觉。举个例子:有些论文的摘要图片很像海报,类似上图(类似论文插图可查看 The global rise ofzero liquid discharge for wastewater management: ...

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养猫还是养狗?听听 Nature 怎么说

今天和妹妹去逛街,路过宠物店突发奇想要买一只小金毛,然而妹妹好像更喜欢角落里那只小猫呢?So,养猫还是养狗,这是个问题。他们说,养猫和养狗的区别是自我认知的区别小祖宗和小棉袄的区别(图 2)它催着你出门和你求着它出门的区别言归正传,想必大家更关心的是:养猫还是养狗更利于家人健康吧!养猫的人对刚地弓形虫一定不陌生。哪里有猫它就待在哪里,当然待在人类身上也可以。孕妇要是被它缠住,肚子里的宝宝可就遭殃了,同时它也是导致感染 ...

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