]琼脂糖凝胶的制备1、 取5×TBE 缓冲液20ml 加水至200ml,配制成0.5×TBE 稀释缓冲液,待用。2、 胶液的制备：称取0.4g 琼脂糖,置于200ml 锥形瓶中,加入50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液,放入微波炉里(或电炉上)加热至琼脂糖全部熔化,取出摇匀,此为0.8％琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发。3、 胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏(宽约1cm)紧密封住。将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子,注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm 左右的间隙。向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(E 溶液使其终浓度为0.5μg /ml(也可不把EB 加入凝胶中,而是电泳后再用0.5μg/ml 的EB 溶液浸泡染色)。用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧,待琼脂糖溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内,使胶液形成均匀的胶层。倒胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则容易出现气泡。待胶完全凝固后拨出梳子,注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入0.5×TB

不同的细胞因子有其特有的生物学活性。细胞因子的生物活性检测法是利用细胞因子对特定细胞株（靶细胞或反应细胞）的生物学效应来评估样本中相应细胞因子的含量和/或活性。生物活性检测法所用的靶细胞可直接从组织中分离，如骨髓细胞的集落形成试验和胸腺细胞(脾细胞)的增殖试验，或用体外培养的依赖细胞因子才能生长的细胞因子依赖株及对细胞因子杀伤敏感的细胞作为靶细胞其测定方法可分为促进细胞增殖和增殖抑制法、抗病毒活性测定法、集落形成法、趋化作用测定法及细胞因子诱导产物测定法等。 1、促进细胞增殖和增殖抑制法： 目前已建立的应用依赖细胞株检测各种细胞因子的方法，其操作过程基本相同。检测细胞因子促生长活性或抑制生长活性是将不同稀释度的待测样品或细胞因子标准品与培养的细胞株共同培养一定时间，然后检测增殖的细胞数。前者的增殖细胞数与细胞因子的含量成正比，而后者的增殖细胞数与细胞因子的含量成反比。常用的检测细胞增殖的方法有3 H-TdR掺入法、比色法、染色法和直接计数法等。其中测定细胞代谢酶反应细胞增殖数的比色法包括 MTT、XTT、MTS和NAG等方法，可在酶标检测仪上自动化检测，且不接触同位素，较

问：我手上现有冻存的小鼠c26结肠癌和lewis肺癌组织块，请问怎样把癌细胞分离出来培养，然后接种到小鼠身上？答：方法：1、组织块——酒精浸泡——剪碎——Hank's冲洗——胰酶消化——离心——Hank's冲洗——离心——计数——转至培养瓶——37℃培养——接种。2、组织块——酒精浸泡——剪碎——转至培养瓶——加培养液——37℃培养——接种。具体操作步骤：一、材料及试剂：仪器：培养箱(调整至37℃)，培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)。材料：小鼠c26结肠癌和lewis肺癌组织块。试剂：1640培养基(含20%小牛血清)，0.25%胰酶，Hank's液，碘酒。二、操作步骤：(一)胰酶消化法：1、器材：将小鼠c26结肠癌和lewis肺癌组织块置75%酒精泡2-3秒钟。2、用Hank's液洗涤三次。3、用手术剪将组织剪成小块(1mm2)，再用Hank's液洗三次，转移至小青霉素瓶中。4、视组织块量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。5、加入3-5ml

xunmixm问： 请教有经验的网友们，我利用重组后的腺病毒感染原代培养的小脑颗粒神经元，转染率在5%左右，但是发现凡是转染进去GFP的神经元全部死亡，（而转进GFP的杂质细胞－如胶质细胞状态良好），神经元表面好像桑葚状，感觉要碎掉了，有的漂起来，看不到有GFP标记的神经轴突。 请教如下问题： 1.造成上述神经元死亡的原因是什么呢？ 2.如何提高腺病毒的转染率？可能我的病毒滴度还不够高。我的操作是腺病毒和神经元共同孵育1h（使用刚盖过细胞的最小体积培养基），然后补加培养基到正常培养体积。请问，在腺病毒滴度一定的条件下，怎样的转染操作能使转染率提高？转染后，是否应该换新液，将腺病毒除掉？ 丁香园网友 kangdejiao 认为： 一般腺病毒载体和腺病毒毒液是完全不同的概念 腺病毒载体转染细胞后包装出来的是腺病毒毒液，然后用毒液去感染你的细胞． 请问你的病毒是带ＥＧＦ的空病毒载体吗，看了你的图片很正常，一般腺病毒的感染效率是百分百的，或者不感

膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一，主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动，主要受脂质双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性，不饱和键的存在会降低膜脂分子间排列的有序性，从而增加膜的流动性，短链能减低脂肪酸链尾部相互作用，在相变温度下，不易于凝集，此外，脂肪酸烃链围绕C- C键由全反式构型到歪扭(CAUCHE)的旋转异构运动，也可使流动性加大。 生物膜适宜的流动性是体现生物膜正常功能的必要条件，在一定范围内，膜流动性增加，有利于膜中酶分子的扩散和旋转运动，使酶活性增加。一些载体蛋白分子的运动性也取决于膜中脂类分子的流动性。研究发现肿瘤对化疗药物产生的耐药性主要与细胞膜P糖蛋白过度表达谷胱甘肽及其相关酶系活性改变有关，也有许多研究表明耐药细胞膜流动性较亲代敏感细胞明显增加。另有实验研究发现腹水癌细胞的恶性程度随着膜流动性的增加而增加，白血病及转移的肿瘤细胞的膜流动性远远高于非转移细胞。因此，对敏感及耐药的肿瘤细胞膜流动性的

该方法是双缩脲法的发展，包括两步反应：（1）在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。（2）此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸（FolIn试剂）还原，混合物深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。此方法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100倍，定量范围为5~100μg蛋白质。FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，均有干扰作用。此方法的缺点是有蛋白质的特异性影响，即不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同，标准曲线也不是严格的直线形式。一、仪器与用具试管若干；刻度移液管05Ml 1支，1Ml 1支，10Ml 1支；定量加样器；圆底烧瓶；冷凝管1套（带橡胶管）；微量滴定管；小烧杯；微量进样器50μl 1支；721分光光度计；恒温水浴器；研钵；玻棒；离心机；离心管。二、试剂Na2WO4·2H2O；Na2MoO4·2H2O；85%H3PO4；浓HCl；Li2SO4·H2O；溴水；酚酞指示剂；Na2CO3；NaOH；CuSO4·5H2O；酒石酸钾钠；牛血清白蛋白。所用试剂均为化学纯或分析纯。三、方法1.

一﹑原理溶血空斑实验是体外检测单个抗体形成细胞（B淋巴细胞）的一种方法，即将经绵羊红细胞（SRBC）免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37℃作用下，免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血空斑。每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。由于溶血空斑实验具有特异性高，筛选力强，可直接观察等优点，故可用做判定免疫功能的指标，观察免疫应答的动力学变化，并可进行抗体种类及亚类的研究。目前有关溶血空斑实验的具体方法很多，现仅将琼脂平板溶血空斑实验的操作方法简介如下。二﹑材料与试剂1、材料平皿（直径5.5cm ×1.5cm），温箱（37℃），水浴箱（45℃），离心机，显微镜及白细胞计数器，18g～25g昆明系小鼠等。2、试剂（1）SRBC悬液 取无菌脱纤绵羊血（或阿氏液保存的血液），用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗3次，每次2000r/min离心5min，最后取压积红细胞，悬于灭菌pH值7.2PBS（含Ca2+、Mg2+）中，使成为20%

引物设计细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点：1、典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。2、选择GC含量为40％到60％或GC含量映像模板GC含量的引物。3、设计5'端和中间区为G或C的引物。这会增加引物的稳定性和引物同目的序列杂交的稳定性。4、避免引物对3'末端存在互补序列，这会形成引物二聚体，抑制扩增。5、避免3'末端富含GC.设计引物时保证在最后5个核苷中含有3个A或T.6、避免3'末端的错误配对。3'端核苷需要同模板退火以供聚合酶催化延伸。7、避免存在可能会产生内部二级结构的序列，这会破坏引物退火稳定性。目的序列上并不存在的附加序列，如限制位点和启动子序列，可以加入到引物5'端而不影响特异性。当计算引物Tm值时并不包

大鼠心肌细胞比乳鼠心肌难养，用无血清培养基，呈杆状，横纹清楚，在培养基里细胞不搏动。 大鼠心肌细胞分离一般是采用二型胶原酶分离，浓度为1mg/ml（用无钙台氏液配制），同时酶液里加入牛磺酸，BSA。一般采用Langendorff灌流的方法，大鼠开胸后，迅速取出心脏，放入冰的台氏液中，找到主动脉后，挂上Langendorff装置，衡流泵灌入无钙台氏液（37度），开始心脏会搏动几下，这样把心脏中的淤血挤出（此处也有人用有钙台氏液灌流，好让心脏充分搏动，把淤血挤出，不过我们摸索发现只要取心脏到挂上去的时间短，一般搏动几下就能把淤血清楚干净了）。几分钟后，换酶液开始灌流心脏，一般开始时，心脏较软，待消化一段时间后变硬，继续消化后又变软，且心脏发白，这时候就可以停止消化，将心室剪下，放入KB液中，用剪刀剪碎后，用滴管吹打，取上清，继续加入KB液，吹打，直到上清液不浑浊为止，一般吹打3－4次即可。将各次上清合并，吹打过滤后，沉降20分钟左右，弃上清，加入无血清培养基（MEM，不含L－谷氨酰胺，并加入肌酸，牛磺酸，BSA，肉毒碱，HEPES），吹打，1000转/分离心半分

模式生物的特点有 : 1) 生理特征能够代表生物界的某一大类群 ; 2) 容易获得并易于在实验室内饲养繁殖 ; 3) 容易进行实验操作 , 特别是遗传学分析 . 常见的模式生物有 : [ 海胆 ]sea urchin 是最早被使用的模式生物 , 主要用于早期发育生物学 ( 受精 , 早期胚胎发育 ). 1891 年 ,Hans Driesh 在显微镜下把刚刚完成第一次卵裂的海胆胚胎一分为二 , 发现分开后的两个细胞各自形成了一个完整幼虫 , 证明了胚胎具有调整发育的能力 . 为现代发育生物学奠定了第一块观念里程碑 . [ 黑腹果蝇 ]fruit fly,Drosophila melanogaster 主要用于遗传和发育研究 其特点为 : 繁殖迅速 , 染色体巨大 , 易于进行基因定位 由 14 个体节构成的躯干完全对称 , 一套基因控制了这些体节从上到下的发生过程 , 这套基因普遍存在于从昆虫到人的基因组中 , 是决定机体左右对称布局形成的最基

问题1：无扩增产物现象：正对照有条带，而样品则无原因:1、模板:含有抑制物，含量低2、Buffer对样品不合适3、引物设计不当或者发生降解4、反应条件：退火温度太高，延伸时间太短对策:1、纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量2、更换Buffer或调整浓度3、重新设计引物（避免链间二聚体和链内二级结构）或者换一管新引物4、降低退火温度、延长延伸时间问题2：非特异性扩增现象：条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带原因：1、引物特异性差2、模板或引物浓度过高3、酶量过多4、Mg2+浓度偏高5、退火温度偏低6、循环次数过多对策：1、重新设计引物或者使用巢式PCR2、适当降低模板或引物浓度3、适当减少酶量4、降低镁离子浓度5、适当提高退火温度或使用二阶段温度法6、减少循环次数问题3：拖尾现象：产物在凝胶上呈Smear状态。原因：1、模板不纯2、Buffer不合适3、退火温度偏低4、酶量过多5、dNTP、Mg 2+浓度偏高6、循环次数过多对策：1、纯化模板2、更换Buffer3、适当提高退火温度4、适量用酶5、适当降低dNTP和镁离子的浓度6、减少循环次数问题4：假阳性现象：空白

食品中的脂类主要包括脂肪（甘油三酯）和一些类脂质，如脂肪酸、脂、糖脂和固醇类k食物中的脂类 95％是甘油三酯，5％是其他脂类。人体贮存的脂类中，甘油三酯高达 99％。脂类的共同特点是具有脂溶性，不仅易溶解于有机溶剂，还可溶解其他脂溶性物质如脂溶性维生素等。人类膳食脂肪主要来源于动物的脂肪组织和肉类以及植物的种子。动物脂肪相对饱和脂肪酸和单个不饱和脂肪酸多，而多不饱和脂肪酸含量较少。植物油主要不饱和脂肪酸。脂肪是食品中重要的营养成分之一。脂肪可为人体提供体内不能产生而是必需的脂肪酸；脂肪是一种富含热能营养素，是人体热能的主要来源，每克脂肪在体内可提39.7kj（9.46kcal）热能，比碳水化合物和蛋白质高一倍以上；脂肪还是脂溶性维生素的良好溶剂，有助于脂溶性维生素的吸收；脂肪与蛋白质结合生成的脂蛋白，在调节人体生理机能和完成体内生化反应方面都起着十分重要的作用。但过量摄人脂肪对人体健康也是有害的。食品中脂肪的存在形式有游离态的，如动物性脂肪及植物性油脂；也有结合态的。如天然存在的磷脂。糖脂、脂蛋白及某些加工食品（如焙烤食品及麦乳精等）中的脂肪，与蛋白质或碳水化合物等成分形成结合态。对大

胚胎干细胞的囊胚注射法构建 Cre 转基因动物 先将Cre时空特异表达载体 线性化，之后用电穿孔等方法将其导人胚胎干细胞中，并以同源重组的方式整合进胚胎干细胞的基因组。这种经过遗传改造的胚胎干细胞再被注入囊胚，最后将胚胎植入假孕母鼠的子宫，使其发育成为一个个体。囊胚注射法的具体步骤如下。 (1)选择合适的载体，将Cre重组酶的编码基因与其重组，构建重组质粒。 (2)重组质粒线性化后，用电穿孔、脂质体等方法将其转人体外培养的小鼠胚胎干细胞中。 (3)体外筛选稳定整合外源基因的胚胎干细胞。 (4)筛选出的胚胎干细胞被重新注射到小鼠囊胚中，并植入到假孕小鼠的子宫内，使其重新发育为一个完整的胚胎。 (5)产出的嵌合体小鼠通过杂交，最终获得稳定整合Cre重组酶的纯合体转基因小鼠。 采用雄性原核显微注射法时，Cre表达基因是随机的整合到基因组中去的，因此其表达的时空特异性和表达水平除了受启动子的影响外，还会受到整合位点的影响，因此需要同时生产多个转基因鼠家系，以便从中选出符合要求的转基因鼠。采用这种方法时选择合适的启动子就显

人们把生物从外界摄取维持自身生命所必需的物质及其消化、吸收和排泄过程称为营养(nutrition)。而人类饲喂给的营养物质称为饲料(feedstuff),对食物或饲料中所包含的各种营养物质则统称为营养素（nutrients）。自然界中的各种物质均由化学元素所组成，在已知的一百多种元素中，至少有26种为动物所必需，这些元素绝大部分以化合物的形式存在。目前已清楚了解到，动物需要的营养物质达数十种，可以概括为七大类，即蛋白质、脂肪、碳水化合物、矿物质、维生素、纤维素和水。虽然这些物质在各种饲料中的含量有所不同，但其对实验动物的营养作用是一致的。它们各具有独特的营养功能，在机体代谢过程中又密切联系，共同参加、推动和调节生命活动。1、水及其营养功能水对于动物生存的重要性仅次于氧气，没有水的存在，任何生命活动都无法进行。大部分饲料均含有水分，但不同的种类含水量差异很大。对于植物性饲料，同一种原料由于收割期不同、利用部位不同、加工方法及贮存时间的不同，其水分的含量也不尽相同。动物对水的需要量受多种因素的制约，如动物种类、年龄、生长性能、环境温度湿度等，因此无法规定动物的需水量。及时获得足够的清洁饮水

结合网上查阅的一些信息和TaKaRa使用说明书中的引物设计要求，同时结合文献上的论述，总结出Real-time PCR 引物设计的要求及设计步骤。首先向那些以前发布信息的朋友表示感谢！因为有些是引用你们的（由于引用的比较散，无法署名感谢）1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区5’端的300-400bp区域内，可以用DNAman, Alignment 软件看看结果。2.引物长度一般在17-25碱基之间，上下游引物不能相差太大。3.G+C含量在40%~60%之间，45-55％最佳。4.引物序列要求：A、T、C、G整体分布尽量均匀，不能有部分AT rich，GC rich（特别是3′），避开T/C（Polypyrimidine）或者A/G（Polypurine）的连续结构。5 避开引物内部或者两条引物之间3个碱基以上的互补序列，两条引物间的3′避开有2个以上的互补序列。6.特异性：是用BLAST检索确认引物的特异性。7.引物5′端可以修饰。8.两条引物的TM值不能相差太大。TM值的计算使用专用软管：OLIGO：63-68度； Primer3：60-65度9.引物3′端最

问：我在蛋白方面比较菜，我有个蛋白需要做酶切，蛋白表达主要是以包涵体为主，溶解在8mol/l 尿素，或者1%SDS中，蛋白已经变性了，请问蛋白酶切是否能在变性的条件下酶切，还是一定要等到蛋白复性以后才能酶切? 还请指点一二。能否这样做，就是把变性的蛋白通过透析成酶切的缓冲液体系，然后再酶切，这样那些变性的尿素和SDS都去除，不知道这样操作符不符合理论？答：既然你的蛋白是包涵体，为什么不直接连接到pet21或者pet24中，这样蛋白表达出来之后就是没有tag，就少了酶切这一步了，不是吗？问：是这样，我的课题是接着我上届的师兄做的，有个3C蛋白酶切位点，表达的是膜蛋白，纯化后需要酶切下来才行，但是我一直都没有搞清一个概念，尿素等溶解蛋白是是变性剂，比如TRITON0100那些非离子去污剂溶解蛋白是非变性条件，两者对蛋白来说有什么区别和不同呢，好象膜蛋白一般都是用TRITON-100来溶的，我表达饿这个膜蛋白不溶于TRIOTON ，而容于SDS或者尿素，我纯化后该如何处理才能酶切呢？还请赐教。答：是这样，尿素和盐酸胍是让蛋白变性的，如果复性要去掉他们。triton x100或者sds之类的去

一、移液器应用的技巧手动移液器由来已久，绝大部分用户已经比较了解其用法。电动移液器在我国的普及程度远远不及手动移液器，致使许多用户对电动移液器认识不深。通过以下的对比，加深了解两种移液器的使用方法及技巧。 手动移液器 电动移液器 使用步骤 步骤一： 装电池 装吸头 选择匹配的吸头，将移液器下端接接口垂直下压，左右旋紧吸头。切勿用移液器跺吸头，以免损坏移液器 装好电池后，插吸头，步骤与手动移液器相同。 新采购的电动移液器先充电，一般刚出厂的电池电量都不多。 步骤二： 调节体积 小体积到大体积：手动拧转盘超过目标体积1/3圈后，再拧回目标体积 大体积到小体积：手动拧转盘至目标体积即可。 为确保准确度，有容量锁定装置为佳。 按住按键直至到到达目标

一、目的 1、了解聚丙烯酰胺凝胶电泳原理2、了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程3、了解过氧化物酶同工酶电泳过程二、实验原理1、电泳原理及影响电泳的主要因素带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动，这种现象称为电泳。用电泳技术分离、分析蛋白质、酶、核酸等生物大分子，有较高的分辨率，目前已成为生物科学研究中必不可少的手段之一。带电离子在电场中的泳动速度（1）和迁移率（泳动度）（2）由（2）式可以看出，凡能影响溶液粘度η的因素如温度，影响分子带电量q及解离度a的因素如pH的改变，都会对迁移率产生影响。因此，电泳应尽可能在恒温条件下进行。并选用一定pH的缓冲液。同时，所选用的pH以能扩大各种被分离物质所带电荷量的差异为好，以利于分离各种成分。迁移率与粒子的大小（r）有关，非球形粒子（如DNA）在电泳过程中会受到更大的阻力，即粒子的移动速度还与粒子形状有关。另外，迁移率还受电渗现象的影响。所谓电渗是指在电场中，液体对于固体支持物的相对移动。例如在纸电泳中，由于滤纸（纤维素）上带有负电荷，因感应相吸而使与滤纸相接触的水溶液带正电荷，从而使液体向负极移动，带动着本来是向负极泳动的物质以更快的速度移动

1）检测RNA 溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA 中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R<1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运。当R>2.2时，说明RNA 已经水解成单核酸了。2）RNA 的电泳图谱一般的，RNA 的电泳都是用变性胶进行的，但是根据我的经验，如果你仅仅是为了检测RNA 的质量是没有必要进行如此麻烦的实验的，用普通的琼脂糖胶就可以了。电泳的目的是在于检测28S和18S条带的完整性和他们的比值，或者是mRNA smear的完整性。一般的，如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利（指条带的边缘清晰），并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，我们认为RNA 的质量是好。以上是我们常用的两种方法，但是这两种方法都无法明确的告诉我们RN

ayao0问：前几天学习做细胞脂质体转染看师姐是用的加血清的培养基，整个过程比以前的方法简单方便了很多不用过四个小时就去换液，可以过了48个小时看转染效率很不好，以前也有人用这种方法做过，很成功。到底这种新的方法行不行的通，做的时候需要注意哪些问题丁香园网友kikie认为：用的是invitrogen的lipofectamine2000，说明书上明确说可以用含血清的培养基：Prepare complexes in the plate and culture medium，in the presence or absence of serum.但是过4～6小时还是要换液，为的是减少脂质体对细胞的损伤。丁香园网友monica912认为：这种方法是完全可以的，我经常这样做，没问题的。只是转染后最好4~6小时或过夜就换液，目的就像楼上说的减少脂质体对细胞的损伤。换液时可以用无血清的培养液洗一下细胞（一定要轻），然后再加培养液。丁香园网友biologychem认为：我认为转染时最好换无血清培养基，因为这样可以让细胞饥饿一下，有助于随后转染时细胞对脂质体-质粒复合物的摄取，过4-8小时再换为正常培养