1、目的 规范岛津LC-2010A型高效液相色谱仪的使用。 2、范围 适用于岛津LC-2010A型高效液相色谱仪的使用。 3、规程 3.1 系统组成 本系统由容器箱、 自动进样器、检测部、输液部、柱温箱、系统控制器、Easy3000工作站和电脑等组成。 3.2 准备 3.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气至少20min。 3.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）。 3.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用0.45μm滤膜过滤。 3.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。 3.3 开机 F2 接通电源，按下系统控制器面板上的电源开关 上托画面上显示要输入Login Pass-ID-No的对话框，输入00000后，按 [OK] 显示Menu画面， 选择Method画面，在Method画面进行相关参数设定，然后打开电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 3.4 参数

波长不准故障的检修 在正常使用下，如果显示波长不准，根据波长自检和自校原理，故障是由光电管没有检测到亮线引起的。当显示波长不准时，应首先检查出流动相使用得是否合适，波长设定是否超出仪器的使用范围。当排除了这些人为因素后，利用仪器的自校功能进行一次波长校正（校正方法见使用说明书）。校正后如仍显示波长不准，则按面板上的Func键，把波长设定为254nm，并且使检测池充满甲醇或乙晴，查看SMPL EN（流通池）和REF EN（参比池）的吸光度值。如果流通池和参比池的值相差很大，则故障是由光栅部分污染或氘灯能量降低引起的，按面板上的VP和Func键，查看氘灯的使用时间是否超过2000小时。如果氘灯使用时间过长，即使氘灯能够正常启动，有时也发不出0nm,486nm和656nm亮线，从而引起波长不准。这时，需要更换新的氘灯。如果氘灯使用时间不长，则故障是由光栅部分引起的。 2 光栅部分的检修与调试 光栅部分主要是由M1、M2、M3、石英窗口和光栅组成的，是整个光路的核心。反射镜镜面的光洁度越高，光电池接受到的光就越强，仪器的灵敏度就越高。如果紫外光长时间故地功能

1启动LCsolution 1.1选择【操作菜单（Operation)】。 1.2点击分析装置的图标。 1.3输入用户名Admin和密码，点击【OK】。 1.4进入下一界面后，点击【数据采集（System Check）】。 1.5确认显示“LC Ready”。 2 建立新方法 2.1 点击【建立新方法】钮。 2.2 设定LC装置参数 2.2.1 点击【通常（normal）】钮。 2.2.2 选择【简易设定（simple Setting）】选项。 2.2.3 在[LC结束时间（LC stop time）]上输入时间。 2.2.4 在泵（pump）的方式上选择“low pressure gradient”，T.Flow上输入[1]ml/min.在输入其他（B.C.D）泵的比例。 2.2.5 在检测器A（detecter A）的[波长（CH1）]上输入检测波长，在[结束时间（end time）]上输入结束时间。 2.2.6 在柱温箱（Oven）上输入温度。 2.2.7设定梯度条件（如果要进行梯度洗脱时设定） 2.2.7.1选择LC【时间程序（LC Time Prog）】选项。 2.2.7.2

一 载气钢瓶的使用规程 1 钢瓶必须分类保管，直立因定，远离热源，避免暴晒及强烈震动，氢气室内存放量不得超过二瓶。 2 氧气瓶及专用工具严禁与油类接触。 3 钢瓶上的氧气表要专用，安装时螺扣要上紧。 4 操作时严禁敲打，发现漏气须立即修好。 5 用后气瓶的剩余残压不应少于980 kPa。 6 氢气压力表系反螺纹，安装拆卸时应注意防止损坏螺纹。 二 减压阀的使用及注意事项器仪表同 1在气相色谱分析中，钢瓶供气压力在9.8-14.7 MPa。 2 减压阀与钢瓶配套使用，不同气体钢瓶所用的减压阀是不同的。氢气减压阀接头为反向螺纹，安装时需小心。使用时需缓慢调节手轮，使用权后必须旋松调节手轮和关闭钢瓶阀门。 3 关闭气源时，先关闭减压阀，后关闭钢瓶阀门，再开启减压阀，排出减压阀内气体，最后松开调节螺杆。

1、仪器方面的最新进展 　　自动化程度进一步提高，特别是EPC（电子程序压力流量控制系统）技术已作为基本配置在许多厂家的气相色谱仪上安装（如Agilent6890，ShimadzuGC-2014GC-2010，Varian3800，PEAutoXL，CEMega8000等），从而为色谱条件的再现、优化和自动化提供了更可靠更完善的支持。 　　与应用结合更紧密的专用色谱仪，如天然气分析仪等。 　　色谱仪器上的许多功能进一步得到开发和改进，如大体积进样技术，液体样品的进样量可达500微升；检测器也不断改进，灵敏度进一步提高；与功能日益强大的工作站相配合，色谱采样速率显著提高，最高已达到200赫兹，这为快速色谱分析提供了保证。 　　色谱工作站功能不断增大，通讯方式紧跟时代步伐，已实现网络化，从技术上讲，现在实现气相色谱仪的远程操作（样品已置于自动进样器中）是没有问题的。 　　新的选择性检测器得到应用，如AED、O-FID、SCD、PFPD等。 　　2、色谱柱 　　新的高选择性固定液不断得到应用，如手性固定液等。 　　细内径毛细管色谱柱

一.载气及流速 1. 载气对柱效的影响：主要表现在组分在载气中的扩散系数D m(g)上，它与载气分子量的平方根成反比，即同一组分在分子量较大的载气中有较小的D m(g) 。根据速率方程： （1）涡流扩散项与载气流速无关； （2）当载气流速 u 小时，分子扩散项对柱效的影响是主要的，因此选用分子量较大的载气，如 N2、Ar，可使组分的扩散系数 D m(g)较小，从而减小分子扩散的影响，提高柱效； （3）当载气流速 u 较大时，传质阻力项对柱效的影响起主导作用，因此选用分子量较小的气体，如 H2、He 作载气可以减小气相传质阻力，提高柱效。 2. 流速（u）对柱效的影响：从速率方程可知，分子扩散项与流速成反比，传质阻力项与流速成正比，所以要使理论塔板高度H最小，柱效最高，必有一最佳流速。对于选定的色谱柱，在不同载气流速下测定塔板高度，作 H-u 图。 由图可见，曲线上的最低点，塔板高度最小，柱效最高。该点所对应均流速即为最佳载气流速。在实际分析中，为了缩短分析时间，选用的载气流速稍高于最佳流速。 图1 H-u 曲线 二. 固定液的配比

安装色谱柱 1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。 2.填充柱有卡套密封和垫片密封，卡套分三种，金属卡套，塑料卡套，石墨卡套，安装时不易拧的太紧。垫片式密封每次按装色谱柱都要换新的垫片（岛津色谱是垫片密封）。 3.色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。 4.毛细管色谱柱安装插入的长度要根据仪器的说明书而定，不同的色谱汽化室结构不同，所以插进的长度也不同。需要说明的如果你用毛细管色谱柱采用不分流，汽化室采用填充柱接口这时与汽化室连接毛细管柱不能探进太多，略超出卡套即可。 氢气和空气的比例对FID检测器的影响 氢气和空气的比例应1：10，当氢气比例过大时FID检测器的灵敏度急剧下降，在使用色谱时别的条件不变的情况下，灵敏度下降要检查一下氢气和空气流速。氢气和空气有一种气体不足点火时发出“砰”的一声，随后就灭火，一般当你点火电着就灭，再点还着随后又灭是氢气量不足。 使用TCD检测器 1.氢气做载气时尾气一定要排到室外。 2.氮气做载气桥流不能设大，比用氢气时要小的多。 3.没通载气不能给桥流，桥流要在仪器温度稳定后开始做样前在给。

气相色谱仪的气路系统，是一个载气连续运行、管路密闭的系统。气路系统的气密性，载气流速的稳定性，以及流量测量的准确性都对色谱实验结果有影响，需要注意控制。 气相色谱中常用的载气有：氢气、氮气、氦气、氩气和空气。 这些气体除空气可由空压机供给外，一般都由高压钢瓶供给。通常都要经过净化、稳压和控制、测量流量。 气相色谱仪如何选用不同气体纯度的气源做载气和辅助气体，虽然是一个老的技术问题，但是对于刚刚接触气相色谱仪的用户，目前很难找到有关这方面的综合资料，所以他们总是到处询问究竟选择什么样的气体纯度最好的这类问题。 1气体纯度的要求 根据每一家用户具体使用的哪一类(高、中、低档)仪器，选择什么样纯度的气体，确实是一个比较复杂的问题。原则上讲，选择气体纯度时，主要取决于：①分析对象；②色谱柱中填充物；③检测器。我们建议在满足分析要求的前提下，尽可能选用纯度较高的气体。这样不但会提高(保持)仪器的高灵敏度，而且会延长色谱柱、色谱仪(气路控制部件、气体过滤器)的寿命。实践证明，作为中高档仪器，长期使用较低纯度的气体气源，一旦要求

清洗步骤 　　1. 每次清洗都用低流速起步，当检测到柱压稳定在一定水平后再增加流速。 　　2. 先用10柱体积不含其它添加剂的流动相中的弱溶剂，如正己烷、氯仿等反冲色谱柱。 　　3. 再用20柱体积的诸如二氯甲烷或异丙醇等流动相中的强溶剂反冲色谱柱。 　　4. 100%异丙醇的极性和正相洗脱能力足够把正相柱上的所有残留物清洗掉。如果异丙醇的清洗还不足以恢复色谱性能，则说明色谱柱柱床有塌陷和空洞了，用清洗的方法无法解决这个问题。色谱症状和清洗再生过后的色谱性能恢复情况往往能提供色谱柱真正存在问题的线索。 　　正相柱除水分 　　诸如保留时间漂移等选择性改变的一些色谱症状，可以归因于固定相的变化，而填料可能还是完好的。在正相色谱中，固定相的水分含量常常是个影响选择性的关键参数。大部分溶剂都内含有小部分的溶解水分(正己烷20摄氏度下水分含量是0.0111% w/w ), 正相色谱柱中水分含量随时间的不同是导致选择性变化的最普通的一个因素。 两篇相关资料，个人感觉不错：《高效液相色谱方法及应用 于世林》 《 HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法》

　　所谓大，即大局、全局。建立大质量工作机制，是学习实践科学发展观的迫切需要，是实现质量提升目标的必然要求，也是质检系统凝神聚气、强基固本的基础工程。毋庸置疑，只有着眼这个大处，才能高起点筹划、高标准建设、高水平践行。古语说：取法乎上，仅得其中。如果一开始就把起点定得比较低，最终的效果当然就不会很好。实践证明，着眼的高度，决定了机制创建工作的力度；筹划的起点，决定建成机制的落点。 　　然而，“天下大事，必作于细，天下难事，必作于易”。建立大质量工作机制着眼于大处，必须着手于小处，从细、易开始，从点滴做起。解决大困难，要从逐步提高解决问题的能力上入手。做成大事，必须要从细节上下工夫。一点点积累解决问题的条件，一步步完成过程中细化的任务，才能做成大事。如果认为建立大质量机制就是做大字文章，一味贪大求大，搞大手笔，造大声势，而不知或不屑于从小事做起，那么最终的结果往往是眼高手低，大手笔落下明显败笔，大声势成了虚张声势。 　　大处着眼和小处着手，应该成为我们建立大质量工作机制的两个基本原则，它们相互依存、协调统一。从大处着眼，不是要我们抓大放小，而是要我们在大的范畴内思考小，在

1、色谱柱中的流动相是否会会排干的问题： 　　不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形：不慎未及时补充流动相，泵将溶剂瓶中的流动相吸干了，HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱？泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了？色谱柱还能使用吗？事实上，如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干，并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气，泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体，而不能输送空气。 　　2、色谱柱变干的问题： 　　另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样，整个色谱柱干涸的情况不太容易发生，多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了，因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了，也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂（如经氦气脱气的甲醇）冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面；已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要（以1mL/min的流速）冲一个小时或更多的时间被彻底浸润，恢复到正常状态。 　　3、使用PEEK（polyethe

1、步骤一：检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查进样垫和气体过滤器，保证辅助气和检测器用气通畅有效。如果以前做过沸点较高的化合物，需要将进样口衬管清洗或更换。 　　2、步骤二：将螺母和卡套装在柱上，并将色谱柱两端口小心切平在色谱柱的一端装上相应的螺母和卡套，此时色谱柱端口无前后之分，色谱柱支架的支撑部分应总是朝向着柱箱门。安装好螺母和卡套后，将色谱柱端口切平，并用放大镜进行检查，以确认切口和管壁成直角，并且没有残留的碎屑，没有毛边或不平的切割面。 　　3、步骤三：将色谱柱连于进样口上通常来说，色谱柱的顶端应保持在进样口衬管的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后，如果针尖与衬管中的色谱柱顶端相差1-2cm，这就是较为理想的状态。从色谱柱架上取出需要连接的足够的长度，并按步骤2切割柱子，连接到进样口。避免用力弯曲压挤毛细柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与色谱柱接触磨擦，以防柱身断裂或受损。将色谱柱正确地嵌入进样口后，用手把连接螺母拧上，用手拧紧后用扳手再拧1/4-1/2圈。 　　4、步骤四：接通载气载气必须为高纯氮气（或氦气），纯度达99.999%，

“基于生物分子电荷和大小的新型生物分析色谱柱，显著改善了我们向用户提供的分离方案”，安捷伦消耗品和备件部门总经理HelenStimson说：“这些新型色谱柱扩展了我们目前的生物分析色谱柱的全线产品，补充现有用于蛋白分离和多肽指纹图的反相色谱柱系列。” 　　　　每一支色谱柱出厂前都经过蛋白样品的检测，确保每根色谱柱和每一批号之间的结果重现性。以下简要介绍这四种新型色谱柱家族以及各自的优点： 　　　　安捷伦BioSEC-3体积排阻色谱柱，使用耐用的3μm填料，提供更高的分离度和更快的分离速度，尤其适用于单克隆抗体聚集体的分析； 　　　　安捷伦BioSEC-5体积排阻色谱柱，使用表面包被中性亲水层的5μm填料，保证填料在苛刻的缓冲液条件下保持稳定； 　　　　安捷伦BioMAb色谱柱，填料为一种弱阳离子交换（WCX）树脂，专为单克隆抗体不同带电衍生体的高分离度分离而设计，以及安捷伦BioIEX色谱柱，专为蛋白质、多肽、寡核苷酸及其他生物分子的高分离度、高效分离和高效回收而设计。 　　　　体积排阻色谱法常用于蛋白质间相互结合形成的蛋白聚集体的分析。离子交换色

2 固定相的选择 　　载体或固定相的粒度小有利于提高柱效率，但不能太小。一般要求填充颗粒直径是柱直径的十分之一左右，即60-80目或80～100目。并且粒度要均匀，粒度越一致，填充得越均匀，柱效率就越高。除分析气体外，分析其它物质大多使用装涂固定液的色谱柱。其优点是可在较低温度下分析高沸点的样品，由于柱温低，固定液选择系数增大，从而提高了柱效率。同时，固定液含量低，缩小了保留值，节省了分析时间。固定液配比的选择取决于样品性质(如沸点，极性)、载体性质及柱温等，此外要求固定液粘度小，蒸汽压低。 　　3 色谱柱的选择 　　柱材质：不锈钢柱适用于高温高压条件，可广泛使用。对于有特殊要求的分析，可采用玻璃柱或聚四氟乙烯柱。柱长：在其它操作条件下不变的前提下，适当增加柱长能获得较好的分离效果。但柱子越长，分析时间也相应增加。 　　4 载气压力和流速的选择 载气压力对柱效率有直接的影响。如提高柱内压力，有助于提高柱效率。但只提高人口压力，使流速加大且压降太大时，反而会降低柱效率，因此也必须提高出口压力。一般采用在柱后加装适当气阻的方法来解决这一问题。载气流速过

一、进样后不出色谱峰的故障： 　　气相色谱仪在进样后检测信号没有变化，仪不出峰，输出仍为直线。遇到这种情况时，应按从样品进样针、进样口到检测器的顺序逐一检查。 　　1、首先检查注射器是否堵塞，如果没有问题， 　　2、再检查进样口和检测器的石墨垫圈是否紧固、不漏气， 　　3、然后检查色谱柱是否有断裂漏气情况， 　　4、最后观察检测器出口是否畅通。 　　5、检测器出口的畅通是很重要的，有人在工作中会遇到这样的问题：前一天仪器工作还一切正常，第二天开机后却无响应峰信号。检查进样口、注射器、垫圈和色谱柱都正常，可就是不出峰，无意中发现进样口柱头压达不到设定值，总是偏高，这时才怀疑是ECD检验器出口不畅通。由于ECD的排放物有一定的放射性，所以ECD出口是引到室外的。当时是秋冬之交，雨水进入到ECD排出口之后冻住了，因此造成仪器ECD的出口堵塞，柱头压居高不下，气体在气路中无法流动，也就无法载样品到检测器，所以不出峰。 　　二、基线问题： 　　气相色谱基线波动、飘移都是基线问题，基线问题可使测量误差增大，有时甚至会导致仪器无法正常使用。 　　1、遇

采用PEG-20M毛细管柱，采用FID检测器，内标法完成对优质食用酒精中甲醇、杂醇油等微量组分的检测。分析结果完全符合国标GB10343-2002的要求。 (一)白酒中有关醛、醇、酯的分析： 采用氢焰离子化检测器，使用20%DNP+7%吐温-80，或兰州化物所大口径￠0.53mm专用毛细管柱，完成浓香型白酒和清香型白酒中主要的醇、醛、酸、酯各个组分的分析。使用毛细管柱除提高了分析效率外，还能检出有机酸，为复杂的酿造发酵工艺提供了更多有价值的信息。分析结果完全符合国标GB10345.7-89/GB10345.8-89。 (二)植物油中残留溶剂的检测： 可以按照国标GB/T5009.37-2003顶空气相色谱法对浸出油中6号溶剂残留量进行测定。采用氢焰离子化检测器，内装涂有5%DEGS固定液的填充柱，外标法标准曲线定量。也可以采用DJ-200型顶空进样器(可以放置6个顶空瓶，顶空瓶规格：2、10、20ml任选)。采用顶空进样器确保了分析的可靠性，提高了分析效率，可加热的气密针套，确保样品无稀释、无冷凝。 (三)室内空气

1.1 特点说明： .. 集成“低电磁干扰”、“长寿命型”微型真空泵、数字式显示面板、精密控制电路等部件， 组成真正意义上的“智能真空泵”； .. 真空度(负压)可实时调节、并通过液晶屏实时显示；流量可实现从“0～仪器最大流量” 调节，再也不用费时费力加阀门、控制电路等，经过漫长试验过程，才有可能达到控制 真空度、流量的目的了。 .. 220V AC(交流)供电，不需变压器，直接使用。 1.2 技术参数说明： 真空度(绝对压力) 电源功率 流量 三种单位换算值 负压 (相对压力) 重量 型 号 (V AC) (W) (L/min) (KPa) (mmHg) (mbar) (KPa) (Kg) ANB2005 220/50Hz 10 5 20 152 200 -80 约4.6 ANB3025 220/50Hz 20 25 30 228 300 -70 约5.3 对比：标准大气压101 760 1013 0 【气路说明】 1、选型特别注意： .. 本机抽气端可以带大负载，甚至完全堵塞，均属正常工作。 .. 本机排气端必须通畅，在排气管路中不得有任何阻尼元件！ 否则，否则，请联系我们定做。

一、运行多功能离子色谱仪 1、打开钢瓶气源开关，分压表调到0.2-0.3Mpa(建议不关闭钢瓶气源)； 2、调节减压阀到3－6Psi左右； 3、依次打开SP泵、DC色谱单元的电源开关。 4、如仪器长时间不使用或更换淋洗液后，要先打开平衡泵头上的PRIME阀排气。 5、打开电脑，待右下角变色龙服务器图标变灰色后，双击桌面的变色龙，打开控制面板。 二、平衡、运行样品 6、开泵，根据连接的柱子设定泵流速、设定柱箱温度；在ED页面打开电化学检测器电压，选择CVMODE为INTAMP并选定波形（WAVEFORM）。 7、系统平衡 8、编辑运行样品表（SEQUENCE） 9、系统平衡好后，停止采集基线，启动样品表（依次点击BATCH、START），选择要运行的样品表。 10、做完样后双击打开第一个标准，点击QNT-EDITER，进行数据处理。 三、关机 11、关机前的工作 糖PA10：使用200mM氢氧化钠冲洗系统15分钟，然后再换成18mM清洗15－20分钟； 氨基酸：最好在结束样品后走一空白梯度或进针水走一75分钟的梯度； 糖

手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡（吸样时要慢、快速排出再慢吸，反复几次，10ul注射器金属针头部分体积0.6ul，有气泡也看不到，多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡，（指10ul注射器，带芯子注射器平感觉）进样速度要快（但不易特快），每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。 安装色谱柱 1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。 2.填充柱有卡套密封和垫片密封，卡套分三种，金属卡套，塑料卡套，石墨卡套，安装时不易拧的太紧。垫片式密封每次按装色谱柱都要换新的垫片（岛津色谱是垫片密封）。 3.色谱柱两头是否用玻璃棉塞好。防止玻璃棉和填料被载气吹到检测器中。 4.毛细管色谱柱安装插入的长度要根据仪器的说明书而定，不同的色谱汽化室结构不同，所以插进的长度也不同。需要说明的如果你用毛细管色谱柱采用不分流，汽化室采用填充柱接口这时与汽化室连接毛细管柱不能探进太多，略超出卡套即可。 氢气和空气的比例对FID检测器的影响 氢气和空气的比例应1：10，当氢气比例过大时FID检测器的灵敏度急剧下降，在使用色谱时别的条件不变的情况下，灵敏度下降要检

色谱法又称色层法或层析法，是一种物理化学分离法。色谱法是俄罗斯植物学家 Michail Tswett 于 1903 年首先提出的。他在研究植物叶色素成分的分离时，使用了一根竖直的玻璃管，内装颗粒碳酸钙，把植物叶的石油醚浸取液加在柱的顶端，浸取液中的色素就被吸附在碳酸钙的颗粒上，然后再加入石油醚，使其自由流下，此时植物色素的浸取液沿玻璃管柱向下移动，结果色素在管内被分离成具有不同颜色的色带，每个色带即为不同颜色的色素，然后按色带的颜色对色素混合物进行鉴定分析，他将这种分离方法称为色谱法。这根装有碳酸钙的玻璃管称为色谱柱，管内保持固定的填充物 ( 当时填充的碳酸钙颗粒 ) 称为固定相，流经固定相的孔隙或表面的冲洗剂 ( 当时的石油醚 ) 称为流动相。 Tswett 的工作很长时间未被人注意，直至 1952 年英国生物学家 Martin 等人在研究液相色谱的基础上，创立了气液分配色谱法，由于他采用了灵敏度比较高的检测器，从而使色谱分析法得到迅速发展和广泛应用。色谱法不但可以用于分离有色物质，而且还大量地用于分离无色物质，色谱法也就失去了原有的含义，但历史的原因，“色谱”这一