‌FcR阻断剂，‌让流式实验中的干扰无处遁形

‌FcR阻断剂，‌让流式实验中的干扰无处遁形

说到Fc阻断，就不得不提到抗体。抗体的结构分为Fab和Fc段，Fab段是与目标分子特异性结合的区域，Fc段是Ig与效应分子或者细胞相互作用的部位^[1]（图1）。Fc受体（Fragment Crystallizable Receptor，FcR）是免疫调节受体中非常重要的受体，主要在先天免疫细胞上表达，能被抗体的Fc段识别并结合，从而引发免疫应答。

图1：抗体结构

 

为什么要做Fc阻断?

在细胞学实验中，正确区分阳性和阴性细胞十分重要。获得良好的阳性细胞群，得益于抗体的特异性结合，但是多数免疫细胞表面都会表达FcR，并且与抗体的Fc段有不同程度的亲和力。因此，抗体Fc段会非特异结合细胞FcR（图2），在流式图中便会出现一群本不应该存在的非特异性细胞群（图3）。

值得注意的是，这种非特异性结合的信号，并不会因为同型对照的使用而被扣除掉，容易导致在流式分析中出现背景增高甚至假阳性信号的结果。

图2：抗体与细胞结合的示意图

 

图3：FcR block流图对比

哪些实验需要考虑Fc阻断？

从广义上来讲，任何涉及抗原抗体反应的实验，涉及到的细胞类型表达FcR，同时反应抗体含有Fc段，都应该考虑进行Fc 阻断，来确保实验的特异性，减少非特异的产生。

那么，具体哪些细胞类型需要做Fc阻断？

首先，按FcR所结合的Ig种类不同可将其分为五类，即IgG（FcγR）、IgE（FcεR）、IgA（FcαR）、IgM（FcμR）和IgD（FcδR）。

IgG类型抗体的Fc受体是FcγR，依据和Fc片段亲和力的强弱，FcγR又可以被分为三个亚家族：FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）和FcγRIII（CD16）以及进一步还可以分为不同亚类。如图4可以看到表达FcR的细胞包括：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、B淋巴细胞、NK细胞、人血小板和肥大细胞等，这些细胞在其表面表达多种FcR，其中以B细胞、中性粒细胞、NK细胞、单核细胞和巨噬细胞尤为显著^[2]。使用FcR阻断剂，可以有效消除假阳性，降低检测背景，获得更清晰的结果。

图4：Fcγ受体的主要类型及其分布的细胞类型示意图。

+, 组成性表达; –, 不表达; #, 诱导性表达; ~E_表达依赖于FCGR2C等位基因状态

 

划重点：

对于FcR高表达，或具有Fc高亲和性的细胞，例如髓系细胞系等，建议实验中添加FcR阻断剂，用于减少非特异反应；此外，对于检测或分析表达水平较低的表面抗原物时，也建议进行Fc阻断，以提高检测特异性。或处理复杂样本或复杂panel时，为了避免可能造成的非特异反应，也可尝试进行FcR阻断，以获得准确实验结果。

 

美天旎生物技术公司FcR阻断剂（130-059-901和130-092-575）开学大促，为您的实验增加一份准确度。

 

[1] Chiu ML, Goulet DR, Teplyakov A, Gilliland GL. Antibody Structure and Function: The Basis for Engineering Therapeutics. Antibodies. 2019; 8(4):55. 

[2] Bournazos, S., Gupta, A. & Ravetch, J.V. The role of IgG Fc receptors in antibody-dependent enhancement. Nat Rev Immunol 20, 633–643 (2020). https://doi.org/10.1038/s41577-020-00410-0