热酚法抽提酵母总RNA的方法
互联网
1. 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中,30℃过夜旋转培养。
2. 稀释过夜培养的菌液,重新在10ml培养基中培养细胞。
3. OD600达到1.0时,收菌,4000rpm/min离心5min,弃培养基。
4. 将细胞悬浮于400μlAE缓冲液(50mMSodiumAcetate,10mMEDTA调整pH值至5.2)。
5. 加入1/10体积的10%SDS,充分混合。
6. 加入等体积在65℃预热的酸性酚(pH4.5),混合。
7. 65℃加热5min,冰上放置10min。
8. 在室温下8000rpm/min离心10min。
9. 取水相,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇(25∶24∶1),10000rpm/min离心8min。
10. 取水相,加入等体积氯仿/异戊醇(49∶1)10000rpm/min离心8min。
11. 加入1/10体积3MpH5.2的醋酸钠,2.5倍体积的纯乙醇,-20℃过夜沉淀。
12. 沉淀样品于4℃离心5min,去除液体。
13. 在冰上干燥RNA(放置15min),最后用适量DEPC水溶解RNA。
(生技网 www.biogo.net)