从免疫血清纯化抗体
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1. 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜,置于1.5ml eppendorf 管中,浸没于1 ml,1 mg/ml 的抗原溶液中,5 min。
2. 取出膜,置于滤纸上干燥。
3. 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管,轻轻震荡混匀30 min。
4. 移去Buffer A,用新鲜的Buffer A 洗一次,将膜浸没于0.8-1 ml 相应的抗血清中,1-2 h,于混匀器上轻轻震荡混匀。
5. 移去血清,用PBS 洗膜,4 次,每次5 min。
6. 洗脱抗体
新配置100 mM 甘氨酸(pH 2.5)抗体洗脱液,将膜置于洗液中,手轻摇混匀2 min,迅速将洗液转移至装有100 μl 1 M Tris(pH 8.0)中和,使抗体复性。第1 次洗脱用400 μl 抗体洗脱液,第2,3 次用200 μl。
7. 往洗脱下来的液体中加入100 μl Buffer A 以稳定抗体,并分装成30 μl 每管,于-20℃保存。
注:所有步骤均在室温完成。
Buffer A:5% BSA,10 mM Tris,0.15 M NaCl,0.2% NP-40,pH 7.4。