从免疫血清纯化抗体

从免疫血清纯化抗体
1． 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸没于1 ml
1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。
2． 取出膜，置于滤纸上干燥。
3． 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，轻轻震荡混匀30 min。
4． 移去Buffer A，用新鲜的Buffer A 洗一次，将膜浸没于0.8-1 ml 相应的抗血
清中，1-2 h, 于混匀器上轻轻震荡混匀。
5． 移去血清，用PBS 洗膜，4 次，每次5 min。
6． 洗脱抗体
新配置100 mM 甘氨酸(pH 2.5)抗体洗脱液，将膜置于洗液中，手轻摇
混匀2 min，迅速将洗液转移至装有100 μl 1 M Tris（pH 8.0）中和，使抗体
复性。第1 次洗脱用400 μl 抗体洗脱液，第2，3 次用200 μl。
7． 往洗脱下来的液体中加入100 μl Buffer A 以稳定抗体，并分装成30 μl 每管，
于-20℃保存。
注：所有步骤均在室温完成。
Buffer A: 5% BSA, 10 mM Tris, 0.15 M NaCl, 0.2% NP-40, pH 7.4