肺癌细胞（人类）消化经验

我培养过不少肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如：

（１）　Ａ５４９（肺腺癌）

（２）　ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌）

（３）　８０１（非小肺细胞癌）

（４）　ＮＣＩＨ４６０　（大细胞肺癌）

在消化传代过程中，步骤基本一致：

吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液－＞加入一定量的新培养液－＞反复吹打细胞－＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞吸出一部分加入新的培养瓶中－＞最后再补充加入一定量新的培养液（ＲＰＭＩ１６４０ｗｉｔｈ　１０％　ＦＢＳ）．

注意：　吹细胞时尽量多吹边角儿，此处细胞生长的多．另外吸出细胞前要混匀．

另注：消化液的配制方法：

Trpsin-EDTA(1X)--0.25% Trpsin with EDTA-4Na

prepared with 2.5g Trpsin(1:250) and 0.38g EDTA-4Na/L in HBSS.