冻融法质粒DNA转化至大肠杆菌操作步骤

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冻融法质粒DNA转化 至大肠杆菌操作步骤

1. 取100μl 感受态细胞于冰浴上融化。

2. 加入1μl 纯质粒 ，轻轻吹打混匀，冰浴30 min。

3. 将菌液放入42℃水浴中热激90 秒，立即放入冰浴中2 min。

4. 加入0.9ml LB液体(提前37℃预热)，于37℃恒温摇床上200rpm×50min 温育。

5. 将菌液5000rpm/min 离心5min，留200μl上清将菌体打散，均匀涂布于含适当

抗生素的琼脂 平板表面(已提前涂布好抗生素，并预热)，平板于37℃倒置培养过夜。