肌肉组织的乙酰胆碱酯酶染色法

问：我想做肌肉组织的乙酰胆碱酯酶染色，没有详细的步骤及注意事项，请熟悉的前辈们给予指点，不胜感激！

答：1、动物麻醉后4％多聚甲醛（0.1M PB配制）固定。

2、取肌肉组织，用灌注液后固定3h。

3、若做冰冻切片，10％，20％，30％蔗糖脱水，用0.1M PB配制蔗糖。若做石蜡切片，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。

4、冰冻切片或石蜡切片。

5、石蜡切片经脱水后入0.01M PBS，冰冻切片直接入0.01M PBS后加入稀释后的一抗（抗乙酰胆碱酯酶抗体）。

6、洗去一抗，加入荧光二抗。

7、封片观察。