【求助】miRNA的功能研究
丁香园论坛
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请问前辈,我想调节miRNA后,做MTT,请问怎么保证inhibitor在MTT孵育液中的浓度,购买的inhibitor都是多少多少nmol的量,直接拿培养基配制吗?因为我转染需要的inhibitor的浓度是50nmol。
转染后直接检测,不需要在培养基中配制。要不的话你合成的那点足够用吗?
转染后直接检测,不需要在培养基中配制
通常 miRNA mimics和inhibitor都是干粉状
用RNase-free water配置即可
可以用lipo2000转染
一般5nmol 用250uL水配置
50nmol浓度 24孔板 需要转1.25ul 可以转200孔
至于MTT检测细胞增殖,我个人认为不太准,有经验的人肯定会发现MTT的检测缺陷
我建议用EdU检测方法
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。
用RNase-free water配置即可
可以用lipo2000转染
一般5nmol 用250uL水配置
50nmol浓度 24孔板 需要转1.25ul 可以转200孔
至于MTT检测细胞增殖,我个人认为不太准,有经验的人肯定会发现MTT的检测缺陷
我建议用EdU检测方法
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子,通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。
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