蛋白的裂解与提取方法步骤

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这是偶整理的蛋白裂解和提取的protocol，希望对大家有所帮助。

10ml 三去污裂解液配方如下：

50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)： 0.07882g

150 mmol/L NaCl： 0.08775g

0.2 g/L叠氮钠： 0.002g

1 g/LSDS 0.01g

100 mg/L Aprotin 0.001g

10 g/L NP-40 0.1g

5 g/L去氧胆酸钠 0.05g

100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF) 0.001g


总蛋白抽提程序：

1.PBS 洗细胞3 次

2.加入裂解缓冲液（1.5x106个细胞大约加入100µL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液），

冰上放置20min

3.收集裂解液

4.离心，12000转，2~10min

5.吸取上清，蛋白定量 ，分装，保存在-80度备用