如何解决色谱柱使用过程中出现的问题

一、保留值与分离度重现性不好原因分析

二、造成色谱峰（ 不对称）拖尾的原因

1．色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；
　　2．柱头有污染；
　　3．样品超载；
　　4．样品溶剂不合适；
　　5．柱外效应；
　　6．化学或二次保留（硅羟基）效应；
　　7．缓冲容量不足或不合适；
　　8．重金属污染。

三、如何解决峰形拖尾的问题

A. 与化学有关的拖尾问题
　　1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用于碱性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物），未知化合物加醋酸三乙胺；
　　2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
　　3．降低进样量至<1μg。

B. 与色谱柱有关的拖尾问题
　　1．如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗；正向柱可用甲醇冲洗；
　　2．使用保护柱。

C. 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽
　　1．进样体积过大，（通常≤25μl）；
　　2．进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应<20cm，内径为0.007"）；
　　3．检测器流通池的体积过大。

四、如何贮存色谱柱

1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌生长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。
　　2．尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴最好）中，避免在缓冲溶液中保存。
　　3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂贮存。
　　4．避免用纯水冲洗键合致密的C18柱。
　　5．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。