萤光素酶载体PGL3转染细胞要不要加G418
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问:最近要做萤光素酶载体PGL3转染细胞,PGL3载体上面带有neo的抗性标记,有一个老师和我说要培养基里面要加G418筛选,但我查了一些PGL3载体转染的文献,都没有提到加G418,所以想问问学长们到底要不要加G418?
答:Neo是一个抗性基因,pGL3系列的载体上有这个抗性基因;Neo在原核(大肠杆菌)中表达的是Kan抗性;在真菌(链霉)中表达的是新霉素抗性;而在真核(细胞、酵母)中表达的则是G418抗性;不知LZ实验目的是什么,若是要筛稳定转染的细胞株的话,则需要加G418,用于筛选,最好使用细胞可以耐受的最高浓度;若只是瞬时转染测荧光活性的话,就不需要加了。。。