DEAE-葡聚糖介导的转染步骤

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DEAE-葡聚糖介导的转染 ，其原理还不清楚，可能是通过内吞噬作用而使DNA转导进入细胞核，此法只适合暂时转染实验，转染效率与DEAE-葡聚糖浓度以及细胞与DNA/DEAE-葡聚糖混合液接触时间的长短很有关系，可采用较高浓度的DEAE-葡聚糖(1g/L)作用较短时间(30分钟-1.5小时)，又可用较低浓度(250g/L)的DEAE-葡聚糖作用较长时间(8小时)。

方法如下：

1. 接种鼠L成纤维细胞浓度为5×105CO2 /孔/皿生长2～3天，当达50%板底面积可用。

2. 乙醇沉淀的4μg的PSV2-neo质粒 DNA，空气干燥后溶于40μL的TE中，或取供体DNA。

3. 用10ml 1×PBS 、4mL、10%富合生长因子血清的DMEM洗板(皿)。

4. 在80μl热的10g/L DEAE-葡聚糖中缓慢加入DNA，取120μL DNA/DEAE-葡聚糖加到每孔(皿)细胞中，使其分布均匀轻轻转动直到显示均匀一致的红色，培养4小时。

5. 从孔(皿)中吸出DNA/DEAE-葡聚糖，加入5mL 10%DMSD，室温放置1分钟，吸出DMSO，用5mL 1×PBS 洗一次吸出，加入10mL培养液(10%血清的DMEM)。

6. 培养细胞，在适当时间分析细胞，若含有抗药基因，可用G418选择培养液培养。