培养细胞活力测定

培养细胞活力测定是肿瘤体外研究中应用最广的技术手段之一。

任何培养瓶内生长的细胞都由死细胞和活细胞组成，从形态上区别死、活细胞是困难的。

方法：四唑盐（MTT）比色法

四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝

四唑盐比色法的原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物（formazan），并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan（甲月替）量成正比。再用酶标仪测定OD值。

MTT法简单快速、准确，广泛应用于新药筛选、细胞毒牲试验、肿瘤放射敏感性实验等。

操作步骤

（1）100μL单细胞悬液接种于96孔板（5×10⁴）。37℃、5%CO₂培养箱中培养一段时间（根据实验目的决定培养时间）

（2）加入2mg/ml的MTT液（50μL/孔）；继续培养3小时。

（3）吸出孔内培养液后，加入DMSO液（150μL/孔），将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟，使结晶物溶解。

（4）酶标仪检测各孔OD值（检测波长570纳米）。记录结果，绘制。