α－萘胺法植物根系活力测定实验

水培水稻
α－萘胺母液
分光光度计 电子分析天平 振荡器 刻度试管 试管架 移液管 移液管架 吸水纸 洗耳球 黑纸 三角瓶 量筒

一、材料仪器设备及试剂

1. 材料：水培水稻等植物根系

2. 仪器设备：分光光度计，电子分析天平，振荡器，刻度试管（或普通试管），试管架，移液管（10 ml、2 ml、1 ml），移液管架，吸水纸，洗耳球，黑纸，100 ml三角瓶，100 ml量筒。

3. 试剂及配制：

50μg· ml－1 α－萘胺母液的配制：精确称取0.1000g分析纯α－萘胺溶于约50 ml蒸馏水中（微微加热），冷却后定容至100 ml，即为1000μg· ml－1α－萘胺溶液，保存于棕色瓶中，置低温黑暗处保存。使用前吸取1000μg· ml－1α－萘胺溶液50 ml加蒸馏水稀释至1000 ml即为50μg· ml－1α－萘胺母液。

1％对氨基苯磺酸溶液配制：称取1g对氨基苯磺酸溶于100 ml 30％乙酸中。

100μg· ml－1亚硝酸钠溶液配制：称取0.1g亚硝酸钠溶于1000 ml蒸馏水中。

0.1mol·L－1磷酸缓冲液（pH7.0）：

A液：称取纯Na2HPO4·2H2O11.876g溶于蒸馏水中成1000 ml。

B液：称取KH2PO49.078g溶于蒸馏水中成1000 ml。

用时取A液60 ml，B液40 ml混合即成。

二、实验步骤

1. α－萘胺标准曲线的制作

（1）取6支20 ml刻度试管，编号，按下表配制每管含量为0～50μg的α－萘胺标准溶液。

加入表中试剂后，摇匀，置于室温（20～25℃）显色5min，然后加入蒸馏水，使每管总体积为20 ml，摇匀，在20～60min内，以0号管为空白对照，在520nm波长处测定每管吸光度（A）值。

（2）标准曲线绘制

以1～5号管的α－萘胺含量为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。

2. 根系处理及空白实验

（1）把待测定水稻根用水洗净，再用吸水纸吸干根上的水后，称取1～2g，放入100 ml三角瓶中，加入50μg· ml－1的α－萘胺溶液和磷酸缓冲液的等量混合液50 ml轻轻摇动。

（2）静置10min后，根的迅速吸附业以完毕，从瓶中取2 ml溶液放入20 ml刻度试管测定α－萘胺含量（见下方法3），以此作为开始值（第一次取液）。其余的溶液塞好瓶塞后，放在振荡器上，在25℃下反应振荡3～6 h（无振荡器时，要在反应期间，定时摇动）。反应时间完毕后再取2 ml溶液放入刻度试管，待测（第二次取液）。因萘胺溶液会自动氧化，所以在做根系处理时要同时做无根的同样操作的空白实验。

3. 测定

在上述二次所取及二次空白实验所取得2 ml测定液中，各加入10 ml蒸馏水，混匀后再加入1％对氨基苯磺酸1 ml和100μg· ml－1的亚硝酸钠溶液1 ml。混匀，置室温（20～25℃）显色5min，然后加入蒸馏水，使总体积为20 ml，摇匀，在20～60min内，以标准曲线0号管为空白对照，在520nm波长处测定吸光度（A）值。

三、结果计算

根据第一次和第二次样液所测得的吸光度值，从标准曲线查出α－萘胺含量，按下公式计算α－萘胺氧化值。



四、按下表记录实验数据及结果

作物根系活力测定（α－萘胺氧化值）记录表

α－萘胺在空气中会被自动氧化，注意保存。