荧光检测CMC
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1. 用含 10 %小牛血清和抗生素的 RPMI-1640 培养液将 K562 细胞配成 1 × 105 /ml 浓度。用同样培养液将 PBMC 配成 1 × 106 /ml 浓度。
2. 取 96 孔圆底细胞培养板,每孔加 0.1ml K562 细胞悬液;每孔加适量 PBMC 使效靶比为 1 : 1 ~ 5 : 1 ,每种处理 3 个复孔; 3 个对照孔只加效应细胞; 8 个对照孔只加靶细胞; 4 个对照孔只加细胞培养液。每孔加 20 μ l Alamar Blue ;每孔总量为 0.2ml 。
3. 在 37 ℃ 5 % CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 24 小时。
4. 直接在荧光检测仪上检测荧光强度,激发波长 530nm ,发射波长 590nm 。各孔荧光强度值应减去培养液对照荧光强度的平均值,各复孔荧光强度的平均值记为 AF 。按下式计算特异性杀伤百分比:
特异性杀伤(%)= 100 × [AF 靶细胞对照-( AF 实验孔- AF 效应细胞对照) ]/AF 靶细胞对照