肝枯否细胞分离的个人经验

以下是我最近在分离枯否细胞时得出的一点个人经验，仅供大家交流：
1，严格的无菌原则
2，充分的麻醉效果
3，开腹前腹腔注射肝素形成全身肝素化
4，插管前先将前灌流液及IV型胶原酶预热37度
5，先分离门静脉,肝动脉及下腔V，结扎肝A，在门静脉下穿两根线
6，门静脉插管双重结扎，以防分离肝脏时硅胶管脱落
7，插管成功后，剪断下腔静脉放血，肝脏在体灌注前灌流液20ML/MIN,20MIN
8,肝脏变白后，小心将肝脏游离出腹腔，置无菌瓶皿中，改用IV型胶原酶液灌洗0.05％ 30ML，反复灌洗20MIN,可见肝脏变软，胞膜分离
9，将肝胞膜及结缔组织分离制成悬液，置37度培养箱中培养温育20MIN
10,用PERCOLL细胞分离液25％－50％的浓度梯度，在加梯度液时要缓慢加，最好用细的吸管沿管壁加，在吸取中层细胞时，可先将上层的25％PERCOLL吸去，在小心吸取细胞。