单向混合淋巴细胞培养

[试剂及材料]

(1)供者和受者淋巴细胞悬液：浓度调至1×106/ml。

(2)丝裂霉素C：用培养液或PBS配制300μg/ml。

(3)含20%NCS的RPMI-1640完全培养液

(4)3H-TdR

[操作方法]

(1)刺激细胞的制备：取淋巴细胞1×106，加入最终浓度为30μg/ml的丝裂霉素C，于37℃水浴中作用30min，1000r/min离心10min，弃上清，沉淀细胞用Hanks液洗涤3次；

(2)反应细胞的制备：将分离的PBMC调整细胞浓度为1×106/ml；

(3)取刺激细胞和反应细胞各0.2ml，加入1.8ml含20%NCS的RPMI-1640完全培养液中，置37℃培养6d；

(4)增殖反应的检测：同T、B淋巴细胞增殖反应的检测。

[结果分析]

计算SI，同T、B淋巴细胞增殖反应的检测