MHC-I单体的S300 柱层析
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MHC-I 单体的S300 柱层析
在上述生物素化的样品中，折叠为单体的HLA-I类分子相当于样品中S300的组分。经过S300柱层析，可从样品中分离出折叠为单体的HLA-I类分子
【试剂及材料】
1、 材料
（1）层析蠕动泵（Hiload Pump P-50，Pharmacia)
（2）紫外监视仪（Monitor UV-1，Pharmacia)
（3）部分收集器（RediFrac Fraction Collector，Pharmacia)
（4）层析记录仪（Chart Recorder， Pharmacia)
（5）层析柱（Hiprep 26/60 Sephacryl S-400 Size exclusion column， Pharmacia)
2、 试剂
层析缓冲液：20mM Tris(PH8.0)；150mM NaCl （4 o C预冷）
【操作步骤】
（1）准备好足够量的层析缓冲液，按照操作程序接好层析装置，将进样口与出样口接通，使缓冲液在层析柱中循环，去除柱子中的气泡。
（2）将层析装置调至进样位置，用注射器将样品缓慢注入柱子。小心不要引入气泡。
（3）接通蠕动泵，将流速调至2ml/分钟。收集4分钟流出物（8ml）。
【注意事项】
不同的层析装置的进样方式可能不同，但注意不要在进样时让气泡进入层析柱中。
