酵母表达

经过不断的努力，终于得到酵母表达阳性结果。特把表达的一些心得写下来，希望对正在努力中的XDJM有所帮助，也以此感谢丁香园对我的帮助。

分泌型载体：pPICZaC 宿主菌：X33 培养基：BMGY/BMMY 目的蛋白：20KD

1、表达过程中防止污染是第一关键，酵母太容易污染 了。在用BMGY激活培养时，可进行挑单菌落培养24h,而不用常规的1％接种。摇床可定期用75％酒精喷洒消毒。

2、如果只是检测用，用试管小量培养。先前用250ml的锥形瓶培养，既浪费材料，又耗费精力。目前表达出来的蛋白就是在试管（十几，二十ml的那种）培养的。

3、 1.5ml的BMGY激活24h后，换液，BMMY也用1.5ml.用多少的BMMY决定了你的蛋白表达出来的浓度。用等体积换液，表达完收获的上清不用浓缩，直接上SDS-PAGE。如果担心浓度不够，可缩小BMMY的体积，那实际上也等于在浓缩上清。

先前采用大量培养再取上清进行TCA-丙酮法，丙酮法，氯仿－乙醇法浓缩，效果都不好。