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原代细胞富尔根(Feulgen)反应显示DNA

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基本原理:

显示DNA的传统方法是富尔根(Feulgen)反应,切片先用稀盐酸处理,DNA经弱酸(1mol/L HCL)水解后,在60℃条件下使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接打开,脱氧核糖的一端释放出醛基,并在原位与Schiff试剂反应生成紫红色产物。

原理同PAS反应,使细胞核DNA显紫红色。在此过程中RNA不受影响,故染色具有DNA特异性。准确的温度和盐酸浓度,适宜的水解时间是成功的关键。水解过度或不足均降低染色强度。

配制试剂:

1. 1mol/L HCL:将8.5ml浓盐酸和91.5ml蒸馏水混合即得;

2. 0.5%亮绿水溶液;

染色步骤:

1. 取培养于盖玻片上的贴壁原代细胞,用Hanks液漂洗三次;

2. 在卡诺(Carnoy)固定液中固定10min,然后蒸馏水洗三次;

3. 移入60℃浓度为1mol/L的HCL中静置10min;

4. 用蒸馏水漂洗几次;

5. 放入Schiff试剂中静置30—60min,可随时检查显色情况;

6. 用自来水冲洗5min;

7. 再用蒸馏水漂洗;

8. 不同浓度梯度乙醇溶液脱水;

9. 用二甲苯透明、树胶封片;

结果:

原代细胞核内DNA显紫红色,细胞质呈绿色。

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