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Feulgen反应步骤

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标本需经固定后方可染色,Carnoy固定液可按无水乙醇:三氯甲烷:冰醋酸为6:3:1比例配制。固定后石蜡切片即可。尽量不用新鲜组织恒冷箱切片,因胞质中存在的缩醛磷脂会出现非特异染色。若必须使用恒冷箱切片,需做切片后固定。用已固定的组织石蜡切片可消除缩醛磷脂。减少非特异染色,具体操作如下:

1.切片脱蜡入水;

2.用lmol/L HCl浸洗;

3.切片放人预热到60℃1mol/LHCi内6分钟,(固定的标本为10~15分钟.Susa固定的标本为18分钟,水解时间因固定液不同而有差异);

4.入室温lmol/LHCl洗;

5.蒸馏水洗;

6.人Schiff液,于室温暗处(或外包黑纸)30~60分钟;

7.人亚硫酸钠水溶液漂洗3次,每次1~2分钟;

亚硫酸钠水溶液配法:

10%NaHS03 5ml

1mol/L HCl 5ml

加蒸馏水至 100ml

8.蒸馏水洗;

9.脱水、透明、封固。

结果:细胞核内DNA染成紫红色

对照实验:

虽然Feulgen法是DNA 的特异染色方法,但如果延长水解时间并在室温下进行反应, Schiff试剂也与醛、酮、醇和缩醛磷脂起反应,因此用Feulgen法检测DNA时必须严格控制盐酸水解的时间和温度。为减少假阳性和非特异性染色必须做对照实验。可按上述步骤做平行对照实验,仅将第3步,即60℃ lmol/LHCl水解改为室温15分钟,其余与上述步骤相同,结果DNA应为Feulgen阴性反应。

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