Feulgen反应步骤

标本需经固定后方可染色，Carnoy固定液可按无水乙醇：三氯甲烷：冰醋酸为6：3：1比例配制。固定后石蜡切片即可。尽量不用新鲜组织恒冷箱切片，因胞质中存在的缩醛磷脂会出现非特异染色。若必须使用恒冷箱切片，需做切片后固定。用已固定的组织石蜡切片可消除缩醛磷脂。减少非特异染色，具体操作如下：

1．切片脱蜡入水；

2．用lmol/L HCl浸洗；

3．切片放人预热到60℃1mol/LHCi内6分钟，(固定的标本为10～15分钟．Susa固定的标本为18分钟，水解时间因固定液不同而有差异)；

4．入室温lmol/LHCl洗；

5．蒸馏水洗；

6．人Schiff液，于室温暗处(或外包黑纸)30～60分钟；

7．人亚硫酸钠水溶液漂洗3次，每次1～2分钟；

亚硫酸钠水溶液配法：

10%NaHS03 5ml

1mol/L HCl 5ml

加蒸馏水至 100ml

8．蒸馏水洗；

9．脱水、透明、封固。

结果：细胞核内DNA染成紫红色

对照实验：

虽然Feulgen法是DNA 的特异染色方法，但如果延长水解时间并在室温下进行反应， Schiff试剂也与醛、酮、醇和缩醛磷脂起反应，因此用Feulgen法检测DNA时必须严格控制盐酸水解的时间和温度。为减少假阳性和非特异性染色必须做对照实验。可按上述步骤做平行对照实验，仅将第3步，即60℃ lmol/LHCl水解改为室温15分钟，其余与上述步骤相同，结果DNA应为Feulgen阴性反应。