硅鱼精子DNA的制备
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(1)在50ml灭菌聚乙烯管中加入1g鲑精DNA,加入15ml DEPC水使其浸泡5min至2h;
(2)加入2.5ml 2mol/L HCl,室温放置,DNA形成白色沉淀,充分振摇至沉淀物相互缠绕在一起,用吸头尖端使之形成一球团状(2~3min);
(3)加入5.0ml 2mol/L的NaOH。摇动小管使DNA悬浮、溶解,将小管置50℃15min助溶;
(4)用DEPC水将混合物稀释至175ml(总体积),充分混合,注意确保管内已无颗粒状;
(5)加入20ml/l 1mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH7.4);
(6)用2mol/L的HCl滴定至DNA溶解pH为7.0~7.5;
(7)用无菌微孔滤膜过滤液体,去除颗粒。260nm测定溶液的OD值,方法是:取20μl DNA液混合于980μl水中,混匀后测定,吸收值乘以50即为DNA浓度(μg/ml);
(8)制备好的DNA液储于-20℃备用,用前取出冻融后煮沸。
(2)加入2.5ml 2mol/L HCl,室温放置,DNA形成白色沉淀,充分振摇至沉淀物相互缠绕在一起,用吸头尖端使之形成一球团状(2~3min);
(3)加入5.0ml 2mol/L的NaOH。摇动小管使DNA悬浮、溶解,将小管置50℃15min助溶;
(4)用DEPC水将混合物稀释至175ml(总体积),充分混合,注意确保管内已无颗粒状;
(5)加入20ml/l 1mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH7.4);
(6)用2mol/L的HCl滴定至DNA溶解pH为7.0~7.5;
(7)用无菌微孔滤膜过滤液体,去除颗粒。260nm测定溶液的OD值,方法是:取20μl DNA液混合于980μl水中,混匀后测定,吸收值乘以50即为DNA浓度(μg/ml);
(8)制备好的DNA液储于-20℃备用,用前取出冻融后煮沸。