细胞生长检测8：三磷酸腺苷检测法（ATP法）

三磷酸腺苷检测法（ ATP 法）

 

1． ATP 反应液（ Bio-Orbit ）是粉末状混合物，含有荧光素、荧光素酶、 0.5mmol 醋酸镁、 50mg BSA 和 0.1 μ mol 无机焦磷酸。在 4 ℃可以保存 1 个月。用前用 10ml 含 2mmol/L EDTA 的 0.1mol/L pH7.75 Tris- 醋酸缓冲液稀释。稀释液分装后可在－ 20 ℃长期保存。

2． 在已经完成促增殖或抑生长试验后的 96 孔细胞培养板中（每孔含 100 μ l 细胞培养液），每孔加 0.1ml ATP 释放因子，室温中反应 5 分钟。取另一块 96 孔细胞培养板，从第一块板的各孔中吸 0.1ml 细胞溶解物到第二块板的相应各孔。

3． 在低于 25 ℃中，将第二块板置自动多孔荧光检测仪中。用自动加样器，每孔加入 20 μ l ATP 反应液，立即检测 10 秒钟的荧光强度。温度升高，检测敏感性就下降。

4． 用 RLU （ Y 轴）对细胞因子标准品的稀释度（ X 轴）作标准曲线，根据标准曲线确定待测样品中细胞因子的含量。