免疫荧光显微法
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溶液准备:
PBS(pH7.4):10mM Na2HPO4 ,1.8mM KH2PO4,50mM NaCl,2.7mM KCl
实验步骤:
1 . 用盖玻片将12孔板盖上,细胞培养至50%浓度。
2 . 将培养液倒掉并用PBS清洗两次。
3 . 在室温下,将细胞用溶解于0.1% Triton×100-PBS中的4%福尔马林固定20min.
4 . 用2ml 1%BSA-4%羊血清-PBS封闭1h(注意:任何抗体或者抗血清,使用前应10000g离心5min,以除去小颗粒)。
5 . 用2ml PBS洗涤两次,每次5min.
6 . 室温下,在40ml 1%BSA-PBS中,加入一抗反应45min.
7 . 用2ml PBS洗涤两次,每次5min.
8 . 室温下,在40ml 1%BSA-PBS中加入偶联好的二抗反应30min.
9 . 用2ml PBS洗涤两次,每次5min.
10. 用防褪色试剂制作标本。
固定准备:
溶解在PBS中4%的福尔马林:每25ml中加入1-2滴10M NaOH对福尔马林进行解聚,然后加热到65℃就可 以得到清晰的溶液,在把它放到冰上测pH值。